WesternBlot實驗（一）

大家都知道Western Blot時間周期較長，大致可以分為忙碌的第一天，和心痛的第二天，像極了愛情。人生若只如初見，何事秋風悲畫扇。經歷轉瞬即逝的新手曙光后，便進入漫長的黑夜。

第一天，從最一步的配膠，到最后一步的孵育膜都極細心像極了愛情的萌芽期，需要精心的呵護。第二天經過繁瑣的洗膜，孵二抗，洗膜，都需要耐心，之后便迎來了驗證奇跡的一刻：顯影，皆大歡喜或者一切皆空。像極經歷愛情的磨合期，也有兩個極端走向，婚姻的殿堂，或者以分手草草了事。

大多數實驗室常用化學發光（ECL）方式，品牌，儀器眾多，當然結果也良莠不齊。頓時回憶起當時做實驗的點點滴滴，前面的工作繁瑣而充實，一天下來覺得很滿足，第二天既期待又緊張，期待有個完美的結果，但又擔心事與愿違。大家懷揣著一顆忐忑不安的心走近暗室或者成像儀。隨后便傳來“為啥背景那么深，為啥沒有目的條帶，為啥分子量不對，被裁掉了…”一系列咆哮不絕于耳，大家都習以為常，相視一笑，接著做自己的事。經過忙碌的兩天，只能被迫接受這種情況嗎？

來比較下膠片和化學發光：

化學發光的動態范圍大于3.3OD，而膠片顯影的動態范圍僅有1.2OD，由此可以看出化學顯影優于古老的膠片顯影。

對于那些蛋白分子量接近，化學顯影背景深的又該如何？

近紅外熒光標記是western blot最理想工具

目前國內實驗室使用的仍是化學發光，而SCI期刊中則有很多使用熒光標記WB，為了緊跟時代的步伐，我們需要引進和創新。那熒光標記的好處在哪？

化學發光的信號是動態的，二抗是酶標記，屬于酶促動力學反應，信號隨時間的變化而變化，信號不與目標蛋白濃度成線性比例關系。而熒光信號熒光是靜態信號，不會隨著時間的變化而變化，信號持久，可達到精準定量。

PVDF膜或者NC膜在可見光區會產生自發熒光，而在近紅外區是幾乎沒有自發熒光，進而消除了背景的干擾。選擇在近紅外區自發熒光較低的轉印膜得到的，效果更好，背景更加干凈，信噪比更高。

化學發光和熒光標記western blot 各有所長，而Azure c600多功能分子成像系統兼顧化學發光的高靈敏和熒光檢測的寬動態范圍和精準定量，滿足實驗室各種需求。