目的蛋白因其物種來源和組織特異性的不同,在種類和性質上有很大差異,因此并沒有一種制備方法可以適用于所有蛋白的提取。這就需要我們進行全面的分析后才能選擇**合適的蛋白制備方法,在這個過程中遵循的一個基本原則是「知己知彼」。
首先,「知己」是要了解:樣品是來自什么物種?目的蛋白定位在哪種組織或細胞器?是可溶蛋白還是不可溶蛋白?是高豐度蛋白還是低豐度蛋白?在制備時需要保持蛋白的天然活性,還是需要變性蛋白。
其次,「知彼」是要知道:哪種方法或試劑能夠防止蛋白降解、聚集、沉淀、變性、修飾?哪種能夠去除高豐度蛋白干擾,富集低豐度蛋白?哪種能去除核酸、多糖、脂肪等雜質?哪種能在有限的實驗條件下,簡便快速地獲得高純度且完整性好的蛋白。
遵循「知己知彼」的原則對蛋白樣品制備進行全面分析,就能明確蛋白樣品制備的合適方法或試劑。