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  • 發布時間:2019-03-26 14:57 原文鏈接: YAC克隆的分析實驗——基本方案

    YAC帶有天然染色體所有的功能元件,包括一個著絲粒,一個DNA復制起點,兩個端粒。YAC能夠容納長達幾百kb的外源DNA,這是質粒和黏粒辦不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因,在染色體步移中每次允許更大的步移距離,同時能夠減少完整基因組文庫所需的克隆數目。


    實驗材料

    酵母菌

    試劑、試劑盒

    AHCYPD甘油

    儀器、耗材

    培養箱冷凍管

    實驗步驟

    1.  用接種棒將含重組載體pYAC的AB1380菌株劃線接種在AHC平板上,倒扣平板于30℃培養,直至長出1~3 mm 大小的紅色菌落為止。

    2.  短期保存:用Parafilm膜將平板周圍封起來,于4℃可保存4~6周。

    3.  長期保存:接種一個單獨的YAC克隆的菌落于3.2 ml YPD培養基中,在30℃搖床過夜,然后加入1 ml 80%甘油,混勻,再分成0.2~1.0  ml 小份將甘油/菌懸液移至冷凍管中,-80℃保存。


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