第一，蓋玻片需要過酸，并且自來水、蒸餾水沖洗干凈。兩張或者以上的玻片很容易因為虹吸作用粘到一起，很容易沖不干凈，很容易把兩張完全重疊在一起的玻片當成一張，一定要看清楚，晾干片子最好是在消毒飯盒中進行，飯盒底面放上紗布，將玻片斜靠在飯盒側壁，玻片正面不要接觸紗布，否則會粘上毛毛的。然后高壓蒸汽滅菌，烤箱中烤干。
第二，爬片前最好用多聚賴氨酸或者層粘蛋白或者膠原溶液處理玻片，未處理過的細胞不容易貼壁，細胞系還好，原代細胞很少能貼得牢。這一步至關重要，否則在后面用PBS洗片時很容易將細胞洗掉。用這些促進細胞貼壁的溶液處理玻片后，放到培養皿之前需要用培養基沖洗一到三遍！層粘蛋白和膠原還好，多聚賴氨酸有幾次我沒沖結果細胞全部不貼壁。
第三，傳代消化下來的細胞一定不要過多稀釋，將濃一點的細胞懸液吹打混勻后滴在玻片上，幾個小時后再追加培養基。
第四，玻片在培養皿中容易漂起，如果事先在皿中鋪上液體很可能會不容易揭下來，或者揭下來時出印子在鏡下很難看。漂起的玻片很容易兩面都培養出細胞的，這時背面的細胞必須去除，挺難操作的，用PBS沖洗可能會傷到正面的細胞，用小鑷子夾玻片很容易夾碎，也很容易脫落，小心點好。
第五，將玻片拿出后一定要記好哪邊是正面，最好做玻片時將玻片切成長方形的。目前市場售的多為18mm x
18mm的蓋玻片，或者24mmx24mm的蓋玻片，正方形，很難分辨反正面，在某個角上打個缺口，對正方形是不中用的。可以用小砂輪切一下改成長方形，至于在某個角上用砂輪做個標記，理論上很簡單，實際操作有難度。
第六，上面步驟都沒問題后，玻片就需要進一步處理了，這里有幾個細節，分述如下：
1.PBS對玻片是沖洗還是浸泡，我個人認為浸泡好，我吃過沖洗的虧，每一步后都要沖洗2-3次，有時還沒等試驗做完，大部分細胞已經被沖掉了，呵呵！我當時欲哭無淚啊！
2.4%的多聚甲醛或者別的固定液的溫度是多少，有人認為4°C的好，有人認為37°C的好，我個人感覺，嬌貴的原代細胞先在常溫下固定較好，然后放到4°C冰箱中。我發現直接用4°C的溶液會造成細胞冷休克，從片上脫落。
3.用中性樹膠粘蓋玻片與載玻片時，盡量少滴樹膠，一點點就夠了，而且至少半個小時以上才能粘牢，防止在水中脫落。否則蓋玻片就會移動，背面會出現樹膠的印子，鏡下很難看，而且擦不掉的。
4.固定好的片子放到冰箱中保存，我倒沒怎么試過，我基本上做好的就直接做免疫組化。
首先，關于消毒的問題，如果細胞在玻片上的時間不到24小時，個人認為玻片泡酸、清洗就行了，不需要消毒。如果需要細胞在玻片上生長較長一段時間，則泡酸清洗后必須消毒。消毒時我喜歡把玻片放在盛有75%酒精的小燒杯里面，用的時候用鑷子小心夾出玻片，在酒精燈上過一下（1秒左右，時間長了玻片會碎裂），玻片上的酒精會被點燃，待酒精烤干就可以用了。效果還是不錯的，這種方法我用了半年，只污染過一次（還不一定是玻片的問題），而且每次細胞在玻片上培養的時間一般在7天以上。
滴加細胞懸液的時候，事先細胞一定要混勻。如果細胞比較多，可以直接往培養皿或孔板內滴加細胞懸液，覆蓋玻片，輕柔混勻，注意呈“十”字形搖晃。如果細胞數量少，需要把細胞都滴加在玻片上，則要先從邊緣開始，然后再往中央滴，這樣有利于細胞均勻分布在玻片上。滴的時候速度要慢，讓液體依靠表面張力呈薄層覆蓋玻片，要防止細胞懸液溢出玻片。這樣一般2-4小時后細胞就貼壁了，這時候再補足的培養基，覆蓋波片。
玻片的正反面。這個沒注意有可能前功盡棄。關鍵是取、放玻片的時候要全神貫注，不能搞反了。采用其他的方法可能更麻煩，不如自己小心點。另外取玻片的時候，由于玻片比較薄，可以用1毫升的胰島素注射針自制一個鉤子，把針頭折彎就可以了，這樣取玻片的時候比較方便。
染色滴加抗體時，為了節省抗體，可以先把抗體滴加在干凈的載波片上，然后玻片的細胞面朝向抗體倒扣，同時注意防止氣泡 和玻片的正反。一般24毫米的玻片只需要30-50微升抗體。當然如果操作不熟練，抗體又足夠，那就直接在玻片的細胞面上加抗體吧 。
玻片上細胞的漂洗。我從來不沖洗，只用PBS浸泡，泡了就倒掉，半分鐘都不到，時間的長短個人感覺影響不大，能把殘留的抗體洗掉就行了。
細胞爬片固定好以后，如果要保存，我們的做法是倒掉固定液，PBS漂洗后干片保存在4度，最長半年沒問題。當然可能不同抗原的保存效果不一樣。