（一）原理：
細胞凋亡是一個受基因調控的主動過程，bcl-2是抑制細胞凋亡的原癌基因，正常細胞的激活和發育過程中都有表達，但在發育成熟的細胞中，其表達降低，在低分化或癌變的細胞中，bcl-2高表達與腫瘤的發生、發展相關，bcl-2過量表達常導致對化療藥物的耐藥性而阻止細胞凋亡，影響治療效果，一旦細胞發生凋亡，其bcl-2表達降低，甚至完全消失。
bcl-2家族由bcl-2、bcl-X、bax、mcl-1和A1組成。進行bcl-2基因表達的檢測有兩種，一種是用抗bcl-2蛋白抗體的流式細胞儀測定法，檢測細胞漿中的bcl-2蛋白量，另一種是采用RT-PCR法測細胞中bcl-2 mRNA的表達。
（二）方法：
1、bcl-2蛋白表達的檢測：
采用流式細胞儀和間接免疫熒光法測定細胞中bcl-2蛋白的量。
收集藥物不同劑量、不同作用時間的凋亡腫瘤細胞，用含2%小牛血清的PBS洗2次。
加入2%多聚甲醛室溫固定20min，再用PBS配制的Staing緩沖液洗滌。
1500r/min離心5min，棄上清，置-20℃存放過夜。
在凍存的細胞內加入1mlPBS配制的TB穿透液放置5min，用Staing緩沖液洗滌1次后，加2%滅活的人AB型血清1ml，37℃放10min。
加入bcl-2多抗工作液40ul，4℃孵育30min后，對照組不加多抗，隨后用PBS洗3次，5min 1次。
加入FITC熒光標記的二抗工作液40ml4℃孵育30min后，用PBS洗3次，用流式細胞儀檢測熒光強度（MFI）的變化，計算bcl-2陽性細胞表達率和bcl-2蛋白表達的平均熒光強度。
2、RT-PCR法檢測細胞bcl-2 mRNA的表達：
（1）總RNA提取：
為了獲得高質量的真核細胞mRNA，必須使用RNA酶抑制劑。操作過程中應避免RNA酶污染器材和試劑，因此所有剝離、塑料器材先用0.1%DEPC水溶液浸泡12h，然后用無菌的新鮮蒸餾水淋洗數次，塑料器材應采用高壓蒸汽滅菌。玻璃器材應于180℃干烤4-6h，所有溶液配制用水均用已滅菌的新鮮蒸餾水配制，所用試劑要新開封的試劑，或無菌分裝至已處理的容器中，操作時應戴60Co輻照的一次性手套，并勤換，以避免環境中和操作時的RNA酶污染。提取總RNA，采用異硫氰酸胍一步提取法即可。
收集藥物處理和對照組的腫瘤細胞，用PBS洗2次，冷藏5min。
加入變性液Solution D 1ml。
用4號針頭抽打混勻，再加入0.1ml的3mol/L乙酸鈉充分混勻，加80%飽和酚1ml，氯仿/異戊醇0.2ml，混勻后置冰上15min。
于4℃、12000r/min離心5min，取上清移入另一潔凈的塑料離心管中，加2.5倍體積的無水乙醇于-20℃過夜。
次日以4℃、12000r/min離心30min，棄上清，用70%預冷乙醇洗2次，干燥10min，加100ulDEP 水溶解RNA，再加入300ul變性液Solution D混合，再加2.5倍乙醇，-20℃放2h。
用70%預冷乙醇洗2次，加 EDPC水溶解，紫外分光光度計測OD260值、OD280值。當OD260/OD280在1.8-2之間時，RNA純度較好。
（2）RT-PCR：
合成cDNA第一鏈。
各組取5ugRNA進行逆轉錄，反應體系共20ul：
a、5X逆轉錄緩沖液5ul；
b、DTT 1ul；
c、dNTP 2ul；
d、Rnasin 1.5ul；
e、Oligo dT 2ul
f、m-MLV 逆轉錄酶 2ul；
g、RNA樣本 5ug
h、DEPC水補充加至20ul。
上述組分充分混合后，現在室溫作用10min，后在42℃反應1h，經95深深地10min，立即置冰浴冷卻至4℃，逆轉錄產物即cDNA第一鏈于-20℃凍存備用。
PCR反應擴增cDNA
a、P1上鏈，5/-GGTGCCACCTGTGGTCCACCTG-3/;
b、P2下鏈，5/-CTTCACTTGTGGCCCAGATAGG-3/.
外參照物β-actin的引物序列如下：
a、P3鏈，5/-AGCGGGAAATCGTGCGTG-3
b、P4鏈，5/-CAGGGTACATGGTGGTGCC-3/
擴增的產物長度分別為459bp，339bp。
以逆轉錄產物為模板分別與bcl-2引物，β-actin引物混合，反應體系共有50ul；
a、雙蒸水32.5ul；
b、10 x 緩沖液5ul；
c、MgCl2 5ul；
d、dNTP 1ul；
e、P1/P3 0.5ul；
f、P2/P4 0.5ul；
g、TaqDNA 多聚酶0.5ul；
h、cDNA樣品9逆轉錄產物）5ul。
擴增條件：94℃預變性7min，設計PCR循環程序，94℃變性60s，55℃復性50s，72℃延伸60s，共30個循環周期，然后72℃延伸5min，4℃保存備用，并供凝膠電泳。
每組取PCR擴增產物8ul在TBE緩沖液中進行瓊脂糖凝膠電泳（2%）。電壓80V，電泳40min，紫外透射儀下觀察電泳條帶，其熒光帶亮度可隨凋亡的程度而有變化，證明bcl-2基因表達與不同劑量化療藥物作用時間有關，bcl-2基因表達與細胞凋亡呈劑量、時間依賴性。