3. 第一鏈產量測定
第一鏈摻入率(%)= 摻入cpm/總cpm ×100%
摻入dNTP(nmol)=2nmol dNTP/μl ×反應體積(μl)×(第一鏈摻入率)
設330為每mol dNTP的平均分子量
合成cDNA量(ng)=摻入dNTP (nmol)×330ng/nmol
mRNA向cDNA轉變率=合成cDNA量(ng) / 模板RNA量(ng)×100%
例如總放射性活性強度為254，000cpm， 摻入放射性活性強度為3040cpm， 所用RNA摸板量為1μg，反應體積為25μl， 則:
摻入率＝3040/254000×100%=1.2
摻入dNTP量=2nmol dNTP/μl×25×1.2%=0.6nmol
合成cDNA量=0.6nmol dNTP×330ng/nmol=198ng
mRNA向cDNA轉變率=198nm/1000ng×100%=19.8%
由于1000ng RNA中20%(5μl/25μl)用于摻入測定，而反應體積占總體積80%，因而實際第一鏈cDNA合成量為0.8×198ng=158ng。
4. 第二鏈產量計算
除需去除第一鏈摻入dNTP外，方法同第一鏈產量計算
第二鏈摻入率= 摻入放射性活性/ 總放射性活性??
摻入dNTP量(nnol)=[0.4nmol dNTP/μl×反應體積(μl)－第一鏈摻入nmol]×第二鏈摻入率
第二鏈cDNA合成量(ng)=nmol dNTP×330ng/nmol
雙鏈cDNA轉變率=雙鏈cDNA合成量(ng)/ 單鏈cDNA合成量(ng)
例: 第二鏈摻入放射性活性強度為2780cmp， 總放射性活性強度為235000cpm.
第二鏈摻入率=2780/235000×100%=1.18%
第二鏈合成dNTP量=[(0.4nmol/μl×100μl)－0.48nm]×1.18% =0.47nmol
合成第二鏈cDNA量(ng)=0.47nmol×330ng/nmol =155ng
雙鏈cDNA轉變率=155ng /158ng×100%=98%
一般cDNA第一鏈轉變率和雙鏈轉變率以12-50%和50-200%為好。
（四） 電泳分析
通常合成的cDNA第一鏈和第二鏈長度為350-6000堿基，需進行1.4%堿性瓊脂糖電泳。將第一鏈和第二鏈摻入測定管中的反應液先用酚抽提，乙醇沉淀，方法見本章（二）第二鏈合成中的9-12步，一般第一鏈和第二鏈上樣量相同。
1. 標準分子量DNA參照物的同位素標記
(1) 通常使用λDNA/HindⅢ片段，用Klenow DNA聚合酶進行32 P標記
10×HindⅢ緩沖液 2.5μl
dATP 0.2mmol/L
dGTP 0.2mmol/L
[α-32 P]dCTP(400Ci/mmol) 2μCi
λDNA/HindⅢ標準DNA 1μg
Klenow DNA聚合酶 1μ
加H2O 到總體積25μl
(2) 室溫放置10分鐘， 加2.5μl 200mM EDTA終止反應， 加入2×樣品緩沖液，貯存于-20℃。