1．試劑及配方：
2 x LB （1升）：
20g 氯化鈉
20g 蛋白提取物
10g 酵母提取物
加入蒸餾水至1升，用NaOH調pH值至7.0，高壓滅菌
2 x LB－甘油（12.5%）（200ml）
175ml 2 x LB液體
25ml 甘油（100％）
加入蒸餾水至200ml，壓滅菌，置于4℃備用
2．步驟
1．將cDNA文庫轉入大腸桿菌，如DH5a(DH10B)后，取少量菌液涂布氨芐平板，以推算克隆總量。
2．取一大小合適的三角瓶,根據克隆總量配制2 x LB液體，每500ml 2 x LB液體可擴增5x105個克隆，可以適當增加2 x LB液體的量，但不能少于此比例
3．按每100ml加0.3g的比例在2 x LB液體中加入SeaPrep agarose
4．70℃加熱攪拌至瓊脂糖溶解,高壓滅菌后再70℃攪拌30分鐘.
5．37℃放置1小時
6．加入適量安芐青霉素,使之終濃度為50ug/ml
7．加入全部菌液,并輕柔旋轉使之混勻,避免振蕩
8．將三角瓶置于冰水中1小時,水面必須沒過三角瓶內液面
9．輕輕取出三角瓶,30℃培養40-45小時
10.將三角瓶內容物全部轉入離心管中,離心10,000g ,20分鐘,必須室溫
11.棄上清,每100ml培養基離心得到的沉淀用10ml 2x LB－甘油（12.5%）重懸.
12.將重懸液留下10ul檢測滴度,其余分裝于1.5ml離心管,-80℃冰箱內保存
13.取1ul擴增后菌液倍比稀釋.
14.各取10ul 稀釋為10-5和10-6的菌液涂布于含安芐青霉素的LB固體平板上,37℃過夜培養,次日計算其克隆數以及擴增后總克隆數.