RNA提取試劑的選擇
RNA提取對于科研人員來說并不陌生,但是要得到好的結果卻不是一件很容易的事情。事實上,現在市面上的豐富的RNA提取試劑基本上可以滿足科研人員的需要,為什么往往提取的RNA卻容易失敗呢?
RNA提取失敗的主要現象有三個:提取的RNA降解、提取的RNA量偏低以及提取的RNA純度低。究竟怎樣才能確保RNA提取的成功率呢?
首先,要確定材料的可用性。盡管現有的RNA提取試劑都用抑制RNase的成分,但提取的材料仍需謹慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時,使用Takara公司的樣品保護劑 Sample Protector for RNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時也可以有效解決組織、細胞樣品的短時間保存及運輸問題。此外,如果將不同時期收集的樣品都預先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達的時序變化,減少實驗組間的誤差。
其次,選擇合適的提取試劑是最重要的一步。好的提取試劑在確保成功的同時,操作方便且經濟實用。對于動物組織、簡單的植物材料、各種微生物、培養細胞的total RNA提取,Takara公司的RNAiso Plus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRa MiniBEST Universal Total RNA Extraction Kit的成功上市,進一步豐富了Takara RNA提取的產品線。該產品采用了獨特的細胞裂解系統,無需苯酚氯仿抽提等步驟,簡單快捷。組織或細胞裂解后,提取操作僅需20分鐘便可完成。
對于富含多糖多酚的植物類組織提取是個難點,Takara精心研發的柱型提取試劑TaKaRa MiniBEST PlantRNA Extraction Kit可以輕松解決這個問題。TaKaRa MiniBEST Plant RNA Extraction Kit可以高效地從各種簡單的植物組織材料(葉片、莖、幼苗等)、富含多糖多酚的植物組織材料(果實、種子等)、真菌提取高純度的TotalRNA,適用范圍廣泛。按照標準流程,本試劑盒可以有效地提取分子量大于200 nt的RNA,也可以按照可選步驟提取得到包含Small RNA(<200 nt)的Total RNA。試劑盒中包含了RNA提取所需的全部試劑,無需額外購買其它試劑。
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植物體內非常重要的小分子非編碼RNA——miRNA在翻譯水平介導的靶標基因抑制是一種非常保守的基因沉默機制。在模式植物擬南芥中,miRNA被裝載到其效應分子ARGONAUTE1(AGO1)蛋白上,以堿......