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  • 發布時間:2023-07-24 11:07 原文鏈接: mtt法原理和步驟是什么

    檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲臜,用酶標儀在490nm波長處測定其光吸收值,在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。

    (1)單細胞懸液接種于96孔培養板;103-104細胞/孔,每孔培養基總量200微升(96孔培養板每孔容積370微升),37℃、5%。

    CO2培養箱中培養一段時間(根據實驗目的決定培養時間)。

    (2)加入2毫克/毫升的MTT液(50微升/孔);繼續培養3小時。

    (3)吸出孔內培養液后,加入DMSO液(150微升/孔),將培養板置于微孔板扳蕩器上振蕩10分鐘,使結晶物溶解。

    (4)酶標儀檢測各孔OD值(檢測波長570納米)。記錄結果,繪制。


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