myTXTL?體外蛋白表達系統的特點

體外蛋白表達系統 Arbor Biosciences是基于大腸桿菌的體外蛋白表達系統：myTXTL無細胞體外蛋白表達系統(Arbor Biosciences中國代理)
 

　　在大腸桿菌蛋白表達實驗中，我們經常會遇到蛋白表達不出來、表達出的蛋白沒有活性、蛋白表達過程中容易形成包涵體等情況，還要分析出現這些情況的原因。
 

　　1、目的蛋白不適合在大腸桿菌中表達。包括稀有密碼子、mRNA結構、跨膜區等;
 

　　2、表達條件需要進一步優化。比如溫度、分子伴侶、適合的表達宿主等；
 

　　3、采用哪種溫和復性條件可以提高蛋白活性，減少包涵體的形成等等。
 

　　除此之外，幾乎每出一點差錯就需要重新開始實驗，表達載體的構建、感受態細胞的轉化、陽性克隆的鑒定、培養基的配制、小量誘導摸條件、大量誘導、離心富集細胞、超聲裂解細胞、親和富集與純化。又需要額外花費一周、幾周甚至半年的時間，時間成本高到讓人心煩不已。
 

　　現在有一個新技術：myTXTL無細胞蛋白表達技術，這個技術可以替代原核細胞大腸桿菌表達系統，可以解決蛋白表達不出來、表達的蛋白沒有活性、原核蛋白表達產物有包涵體的問題。除此之外，這個技術能夠應用于可溶蛋白和膜蛋白表達、蛋白質功能鑒定、高通量篩選、分子間互作分析。還適用于在大腸桿菌中難以表達的蛋白質、蛋白質分子定向進化、噬菌體生產、基因調控網絡構建、基礎研究(比如，CRISPR系統鑒定)、蛋白-蛋白互作、蛋白-核酸互作、蛋白與小分子的相互作用、酶活檢測等。
 

　　myTXTL? 體外蛋白表達系統的特點：
 

　　myTXTL? 是一種簡單快速的蛋白質體外表達系統。基因的轉錄(Transcription, TX)和翻譯(Translation, TL)基于大腸桿菌的內源TXTL機制，在體外建立高效的無細胞反應體系。同時，又保證了T7表達系統的兼容性。
 

　　myTXTL?體外蛋白表達系統操作簡單，僅需將線性模板或質粒與myTXTL? Master Mix混勻，目標蛋白在數小時內即可表達出來。不需要轉化、克隆篩選和細胞裂解，避免了包涵體的形成。同時，避免了產物純化過程中目標蛋白的損失。
 

　　myTXTL蛋白表達系統一次實驗可對多個樣品進行操作，小的反應體系是12 μl，表達出來的蛋白濃度能達到1 μg/μL，反應體系可等比例擴大。
 

　　反應系統里添加了7種大腸桿菌稀有密碼子，去除了密碼子偏好的問題，并且表達的蛋白可正常折疊。