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那些實驗室常用的克隆載體
pUC18 和 pUC19質粒圖譜
pUC18 和 pUC19 大小只有 2686bp ，是最常用的質粒載體，其結構組成緊湊，幾乎不含多余的 DNA 片段，GenBank注冊號為 L08752(pUC18)和 X02514(pUC19)。由 pBR322 改造而來，其中 lacZ (MSC)來自 M13mp18/19 圖 3-4 是其質粒圖譜 。
這兩個質粒的結構幾乎是完全一樣的，只是多克隆位點的排列方向相反。這些質粒缺乏控制拷貝數的 rop 基因，因此其拷貝數達 500-700 。 pUC 系列載體含有一段 lacZ 蛋白氨基末端的部分編碼序列，在特定的受體細胞中可表現 α-互補作用。因此在多克隆位點中插入了外源片段后，可通過 α-互補作用形成的藍色和白色菌落篩選重組 質粒。
特征序列區位：
&NBS p;
| pBR322_origin | &NBS p; | 1471 - 852 |
| Ampicillin | 2486 - 1626 | |
| lac_promoter | 543 - 514 | |
| AmpR_promoter | 2556 - 2528 | |
| M13_pUC_rev_primer | 500 - 478 | |
| M13_reverse_primer | 479 - 461 | |
| M13_forward20_primer | 379 - 395 | |
| M13_pUC_fwd_primer | 364 - 386 | |
| lacZ_a | 398 - 250 | |
| pGEX_3_primer | 51 - 29 | |
| Orf2 | 2486 - 1626 |
NOS terminator sequence:
ggatccatcgttcaaacatttggcaataaagtttcttaagattgaatcctgttgccggtcttgcgatgattatcatataatttctgttgaattacgttaagcatgtaataattaacatgtaatgcatgacgttgtttatgagatgggtttttatgattagagtcccgcaattatacatttaatacacgatagaaaacaaaatatagcgcgcaaactaggataaattatcgcgcgcggtgtcatctatgttactagtaatcgat
設計引物：
Forward primer: 5’ ggaGGATCCggatccatcgttcaaac 3’ (含BamH I 位點GGATCC及三個保護堿基)
Reverse primer: 5’ atcGAATTCATCGATTACTAGTAACATAG 3’ (含EcoR I 位點GAATTC及三個保護堿基)
請查一下NOS終止子序列內有沒有這兩個酶切點。如果沒有，引物合成后，以任何一種pCAMBIA為模板都能擴增到該終止子序列。