peprotech細胞因子注意事項（三）

五、細胞培養和刺激的基本方法

細胞活化的最終結果是產生細胞因子，根據檢測指標和標本的不同，研究人員需要選擇不同的刺激劑和刺激時間，以獲得最佳的實驗結果。下表提供了檢測一些常用細胞因子的推薦的活化方法。

表1、細胞內細胞因子流式檢測推薦的陽性對照活化方法

為防止細胞內細胞因子分泌到胞外，在培養的最后4-6個小時，需要使用蛋白轉運抑制劑（如3uM monensin，10mg/ml的BFA）

方法1：只使用轉染細胞檢測

方法2：人的PBMCs使用PMA （10 ng/ml） 和Ionomycin （1 uM） 刺激4-24 小時.

方法3：人的PBMC 使用LPS （0.5 - 1 ug/ml） 刺激24 小時.

方法4：人的PBMCs或者純化的CD4＋細胞在包被人CD3抗體的培養板中，使用含有重組人的IL-2（10 ng/ml，目錄號202-IL-010）和IL-4（10 ng/ml，目錄號204-IL-005）的培養基培養兩天；細胞洗滌后在含有重組人IL-2和IL-4的培養基中繼續培養2天；最后收獲細胞，使用PMA（10 ng/ml） 和Ionomycin （1 uM）刺激6小時20mL于Falcon管中，加入100mL激活后的全血（細胞濃度維持在2×106/mL） 混勻，室溫暗處孵育15分鐘；

方法5： CD4 T 細胞使用PHA （10 ng/ml） 刺激4 days

方法6： T 細胞使用抗CD3 的單抗、抗CD28的單抗和重組人的IL-1b （Lorre, et al., 1994， Clin Immuno Immunopath 70:1）

方法7： 使用PMA （50 ng/ml） 和Ionomycin （500 ng/ml）刺激

（10 ng/ml，目錄號285-IF-100） 刺激2 小時，然后使用IFN（10 ng/ml） LPS（1 ug/ml）刺激22小時或者使用相同的方法刺激THP-1 細胞.g方法8： PBMCs細胞使用重組人IFN

方法9： EL4 在包被抗小鼠CD3抗體（25 ug/ml）的培養板中，使用抗CD28抗體（2 ug/ml） PMA（5ng/ml） Ionomycin（500 ng/ml） 刺激6小時

方法10：CD4＋T細胞在包被小鼠CD3（25ug/ ml）抗體的培養板中，使用含有抗小鼠的CD28（2 ug/ml）的抗體，重組小鼠的IL-2（10 ng/ml，目錄號402-ML-020）和IL-4（50 ng/ml，目錄號404-ML-005）的培養基培養兩天；然后在含有重組小鼠IL-2和IL-4的培養基中繼續培養3天；最后收獲細胞，使用PMA（5 ng/ml）、Ionomycin（500 ng/ml）和monensin刺激6小時。

方法11： 小鼠ip巨噬細胞使用Mouse ip 1 ug/ml LPS 刺激24小時

方法12： 小鼠脾細胞使用PMA（5 ng/ml）和Ionomycin（500 ng/ml）刺激6小時