三．操作方法
1．夾心式垂直電泳槽使用方法
1）清洗部件：用去污劑清洗長短玻璃板、膠模框及樣品梳，用自來水徹底沖洗，再用去離子水不洗凈，放置晾干或用濾紙擦干（注意不要留下纖維）待用。如有必要，也可先用5%
KOH甲醇溶液（5g KOH溶于100ml甲醇）清洗玻璃板，再按以上步驟洗凈。小心：KOH有腐蝕性，取用時應戴手套和面具。
2）組裝電泳槽：
① 將四只固定螺桿插入帶紅色電極頭貯槽框的孔中，然后將貯槽框仰放在桌上。
② 左手拿膠模框，右手從邊上握住短玻璃板向下插入到膠模框的短槽（三邊有槽的即是）內，然后以同樣方法將長玻璃板插入到長槽（左右兩邊有槽的即是）內，注意手指不要接觸玻璃板的凝膠面（以免留下油脂，使灌膠時產生氣泡），壓緊邊框。
③ 將裝好玻璃板的膠模框平放在仰放的貯槽框上，其下緣與貯槽框下緣對齊。
④ 將另一半貯槽框與桌上的貯槽框相合，并使膠模框上的凸出線位于貯槽框邊的中間。
⑤ 裝上四只螺母并擰緊，注意擰螺母時應用力均勻，最好用雙手按斜線位置雙雙逐漸擰緊。
⑥ 將電泳槽垂直放于桌上，帶短玻璃板的貯槽稱上槽（陰極端），帶長玻璃板的貯槽稱下槽（陽極端），在玻璃板與膠模框間有一縫隙，此縫隙可用已熔化的2%
瓊脂沿玻璃板外邊兩側灌入，以防止漏膠。底部如留有氣泡，可稍抬起一端，即可趕走氣泡。（注意待瓊脂完全凝固后才能倒入膠液灌膠。）
2．凝膠制備
1）15% 分離膠的制備
試劑名稱 體積 終濃度
30% 丙烯酰胺液 5.0ml 15%
分離膠緩沖液 2.5ml 0.375M Tris-HCl
10% SDS溶液 0.1ml 0.1%
去離子水 2.4ml ——
10% APS溶液 60μl 0.06%
TEMED 6μl 0.06%
① 將上述試劑在小燒杯中依次混合。
② 一旦加入TEMED后，馬上開始聚合，故應立即快速旋動混合物，使混勻后沿長玻璃板內側縫隙加入（注意將長玻璃板內側各處都沾濕，以防加隔離水層時水面不平），至與電極絲相平處，留出灌注積層膠所需空間（樣品梳齒長加2cm）。
③ 用滴管在膠液上緩慢而小心地（切忌沖入下層膠液），加上一層約5mm厚的分離膠覆蓋液（也可用水代替，可防止氧氣擴散進入凝膠而抑制聚合反應），讓其在室溫下（最好在30~50℃）聚合（注意膠未凝聚前禁止搖動模具）。
④ 待膠凝聚后（水與凝膠層的界面消失后又再出現時，約15分鐘），盡可能倒出覆蓋液，用濾紙條吸干殘留液體（注意不要留下纖維）。
2）4% 樣品濃縮膠的制備
試劑名稱 體積 終濃度
30% 丙烯酰胺液 1.35ml 4%
濃縮膠緩沖液 2.5ml 0.125M Tris-HCl
10% SDS溶液 0.1ml 0.1%
去離子水 6.0ml ——
10% APS溶液 60μl 0.06%
TEMED 6μl 0.06%
① 將上述試劑在小燒杯中依次混勻。
② 倒入模具中分離膠上，插入干凈的樣品梳（注意避免混入氣泡），讓其在室溫下凝聚（約30分鐘）。
3．樣品處理
1）對照液：取一瓶 Genotropin (4IU)，加蒸餾水2ml，測A280應約為0.6（濃度約為0.6μg/μl）。取10μl與2X樣品緩沖液10μl混勻，100℃水浴加熱3分鐘。上樣量為10μl（約3μg）。
2）原料或成品：用蒸餾水配成1μg/μl的溶液，取10μl與2X樣品緩沖液10μl混勻，100℃水浴加熱3 分鐘。上樣量為10μl（約5μg）。
3）中間體液：
① 011、012樣品：取樣品液與2X樣品緩沖液1:1混勻，100℃水浴加熱3分鐘。上樣量為20~50μl，酌情加減，一般為30μl。
② 013樣品：取樣品液與2X樣品緩沖液1:1混勻，100℃水浴加熱3分鐘。上樣量為165/A280（μl），如下表：
A280 <3.5 3.5~5.0 5.0~6.0 6.0~7.5 7.5~9.5 9.5~13
上樣量 50μl 40μl 30μl 25μl 20μl 15μl
注：當不知A280時，可按前一批上樣量或上30μl。
③ 014、015樣品：取樣品液加1倍體積的水、2倍體積的2X樣品緩沖液，混勻，100℃水浴加熱3分鐘。當A280<10時，上樣量與同批013 樣品相同，一般為30μl；當A280>10時，上樣量為同批013樣品的4/5。
④ 016S樣品：將樣品液稀釋至A280≈1，取30μl與2X樣品緩沖液30μl混勻，100℃水浴加熱3分鐘。上樣量為30~40μl。
⑤ 016、017樣品：將樣品液稀釋至A280為0.5~1.0，取30μl與2X樣品緩沖液30μl混勻，100℃水浴加熱3分鐘。上樣量為 20/A280（μl）。
⑥ 018sp樣品：將樣品液稀釋至A280≈0.5，取30μl與2X樣品緩沖液30μl混勻，100℃水浴加熱3分鐘。上樣量為10/A280（μl）。