SDS-PAGE電泳可用于分離蛋白質和核苷酸
，這里綜述了SDS-PAGE實驗原理、試劑和器材、以及實驗操作步驟。
一.
實驗原理：
SDS-PAGE是對蛋白質進行量化，比較及特性鑒定的一種經濟、快速、而且可重復的方法。該法是依據混合蛋白的分子
量不同來進行分離的。
SDS是一種去垢劑，可與蛋白質的疏水部分相結合，破壞其折疊結構，并使其廣泛存在于一個廣泛均一的溶液中。SDS蛋白質復合物的長度與其分子
量成正比。在樣品介質和凝膠中加入強還原劑和去污劑后，電荷因素可被忽略。蛋白亞基的遷移率取決于亞基分子量。
二.
試劑和器材：
試劑：1.
5x樣品緩沖液(10ml)：0.6ml
1mol/L的Tris-HCl(pH6.8)，5ml
50%甘油，2ml
10%的SDS，0.5ml巰基乙醇，1ml
1%溴酚藍，0.9ml蒸餾水。可在4℃保存數周，或在-20℃保存數月。
2.
凝膠貯液：在通風櫥中，稱取丙烯酰胺30g，甲叉雙丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。過濾后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1個月。
3.
pH8.9分離膠緩沖液：
Tris
36.3g
，加1mol/L
HCl
48ml，加重蒸水80ml使其溶解，調pH8.9，定容至100ml，
4℃保存。
4.
pH6.7濃縮膠緩沖液：
Tris
5.98g
，加1mol/L
HCl
48ml，加重蒸水80ml使其溶解，調pH6.7，定容至100ml，
4℃保存。
5.
TEMED(四乙基乙二胺)原液
6.10%過硫酸銨(用重蒸水新鮮配制)
7.
pH8.3
Tris-甘氨酸電極緩沖液：稱取Tris
6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸餾水約900ml，調pH8.3后，用蒸餾水定容至1000ml。置4℃保存，臨用前稀釋10倍。
8.
考馬斯亮藍G250染色液：稱100mg考馬斯亮藍G250，溶于200ml蒸餾水中，慢慢加入7.5ml
70%的過氯酸，最后補足水到250ml，攪拌1小時，小孔濾紙過濾。
器材：電泳儀
，電泳槽，水浴鍋，搖床。
三.
實驗操作;
1.
樣品制備
將蛋白質樣品與5X樣品緩沖液(20ul+5ul)在一個eppendorf
管中混合。放入100℃加熱5-10min，取上清點樣。
2.
分離膠及濃縮膠的制備
①
將玻璃板、樣品梳、Spacer用洗滌劑洗凈，用ddH2O沖洗數次，再用乙醇擦拭，晾干;
②
將兩塊洗凈的玻璃板之間加入Spacer，按照Bio-Rad
Mini
Ⅱ/Ⅲ說明書提示裝好玻璃板;
③
按如下體積配制10%分離膠8.0
ml，混勻：ddH2O
3.0
ml;1.0
mol/LTris-HCl
pH=8.8
2.1
ml;30%
Acr-Bis
2.8
ml;10%
SDS
80
ul;10%AP
56
ul;TEMED
6
ul。
④
向玻璃板間灌制分離膠，立即覆一層重蒸水，大約20
min后膠即可聚合;
⑤
按如下體積配制6%濃縮膠3.0
ml，混勻：ddH2O
1.0
mol/LTris-HClpH=6.8
30%
Acr-Bis;2.0
ml
400
ul
600
ul;10%
SDS
10%
AP
TEMED;36ul
24ul
4ul。
⑥
將上層重蒸水傾去，濾紙吸干，灌制濃縮膠，插入樣品梳;
⑦
裝好電泳系統，加入電極緩沖液，上樣20
μl;
⑧
穩壓200V，溴酚藍剛跑出分離膠時，停止電泳，約需45
min～1hr.
⑨
卸下膠板，剝離膠放入染色液中，室溫染色1～2
hr;加入脫色液，置于80
rpm脫色搖床上,每20
min更換一次脫色液(10
ml
冰乙酸;45
ml乙醇;45
ml蒸餾水)至完全脫凈。
聚丙烯酰胺凝膠具有分子篩效應，可根據蛋白亞基分子量不同將分離蛋白，SDS-PAGE電泳凝膠好壞直接關系到電泳能否成成，一般濃縮膠和分離膠的pH分別是6.7和8.9.