轉膜你用的是濕轉的方法嗎?濕轉速度比較慢,一般的半干轉能快點,30-45min轉完,現在市面上有很多快速半干轉,3-15min可以完成轉印,可以在轉膜這一步節約一些時間。我還能想到另外一個可以節約時間的部分,就是檢測,如果以前壓膠片,現在可以考慮用成像儀,這個也可以節省一些時間。至于抗體孵育的時間,得根據具體情況來看,有些也可以不用過夜,室溫孵育比較快,但是可能效果就沒那么理想了。
VDF膜一定要在純甲醇里浸潤的!不然蛋白結合不上去。在100%甲醇里短暫浸潤,其目的是為了活化PVDF膜上面的正電基團,使它更容易跟帶負電的蛋白質結合。小分子及大分子量的蛋白轉移時,多加或不加甲醇也是......