一文了解細胞培養血清的使用方法

在細胞培養實驗中，血清的使用是關鍵環節之一，其保存、解凍和滅活操作的正確性直接影響細胞的生長狀態和實驗結果的可靠性。以下是血清保存、解凍與滅活的操作流程，供實驗人員參考：

一、血清保存方法

1、長期保存溫度：血清如需長期保存，必須儲存于 -10℃或更低溫度的冰箱中，建議存放于 -20℃的冰箱。

2、不建議-80℃保存：雖然儲存在 -80℃條件下的血清在性能方面變化不大，但由于解凍時溫差過大，會導致析出更多沉淀，使得背景雜亂，因此血清長期保存不建議處于 -80℃條件下。

3、短期頻繁使用：如果近期會頻繁使用血清，建議不要在 4℃條件下存放超過 1 個月。

4、分裝保存：若一次無法用完整瓶血清，建議分裝后保存，且要避免反復凍融。

5、預留體積空間：血清冰凍后體積會增加約 10%，因此血清分裝時需留意預留一定的體積空間。

6、運輸條件：運輸血清時，應使用冷凍冰包或干冰運輸，以確保血清在運輸過程中保持低溫

二、血清解凍方法

1、緩慢溶解：將血清置于 2 - 8℃冰箱中，緩慢部分溶解 12 - 24 小時。

2、室溫全溶：隨后將血清放置于室溫下使其完全溶解。

3、均勻搖動：在溶解過程中，需每隔一段時間輕輕搖動血清，以確保其均勻混合。

4、禁止快速解凍：切勿使用 37℃水浴進行快速解凍，以免血清中蛋白質沉淀增加，影響質量。

5、避免長時間存放：解凍后的血清不宜在 4℃冰箱中長時間存放。

三、血清滅活方法

在細胞培養中，血清的熱滅活是一個常見的操作，但并非所有實驗都需要進行熱滅活。實驗表明，經熱滅活處理的血清對細胞生長可能僅有微小促進作用，甚至完全沒有作用。高溫處理可能會導致血清中部分營養成分的損失，從而影響血清質量，降低細胞的生長速率。此外，熱滅活過程中如果局部溫度過高、搖晃不均勻或滅活時間過長，都會導致血清品質下降，并增加蛋白沉淀的概率。因此，除非實驗明確要求，否則不建議對血清進行熱滅活處理。

如果確實需要進行熱滅活，可以按照以下步驟操作：

（一）準備階段

1、搖勻與恢復室溫：熱滅活前，必須先將解凍后的血清搖勻，并恢復至室溫。

2、取樣與對照管準備：取部分搖勻血清置于 50ml 離心管中，并準備同規格對照管一個。

3、對照管加水：對照管內加入血清等體積水。

4、溫度預試：對照管內插入溫度計進行溫度預試。

（二）滅活過程

1、溫度控制：當溫度達到 56℃時，將恢復至室溫的血清放入水浴鍋中，滅活 30 分鐘。

2、均勻晃動：滅活過程中需要每隔 5 分鐘輕輕晃動搖勻，以保證溫度均一。