為什么要測定dna的濃度和純度

首先,分光光度計測量的樣品必須是均一的,搖勻后再測量結果會準確些.它是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器.
核酸的定量是分光光度計使用頻率最高的功能.可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA.核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm.每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同.定量不同類型的核酸,事先要選擇對應的系數.如：1OD 的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig.測試后的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度.測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,爾后測試空白液和樣品液.然而,實驗并非一帆風順.讀數不穩定可能是實驗者最頭痛的問題.靈敏度越高的儀器,表現出的吸光值漂移越大.
事實上,分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化,即儀器有一定的準確度和精確度.如Eppendorf Biophotometer的準確度≤1.0%（1A）.這樣多次測試的結果在均值1.0%左右之間變動,都是正常的.另外,還需考慮核酸本身物化性質和溶解核酸的緩沖液的pH值,離子濃度等：在測試時,離子濃度太高,也會導致讀數漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液,如TE,可大大穩定讀數.樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品.這些小顆粒的存在干擾測試效果.為了最大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A.在此范圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定.從而意味著樣品的濃度不能過低,或者過高（超過光度計的測試范圍）.最后是操作因素,如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值；混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大；換算系數和樣品濃度單位選擇一致；不能采用窗口磨損的比色杯；樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等多個操作事項.
除了核酸濃度,分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm.純凈的樣品,比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）.如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響.A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0.A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子.純樣品,A320一般是0.