乳品中黃曲霉毒素檢測（二）

針對乳品企業黃曲霉毒素超標，分析原因是由于奶牛食用了霉變飼料，導致乳汁中黃曲霉毒素M1超標。因此乳品的黃曲霉毒素污染主要來源是飼料，像玉米、稻谷、豆粕等，放久得飼料就可能發霉產生這種毒素。然而即使是牛奶加工中用高溫的巴氏殺菌法也無法清除黃曲霉毒素，因此從源頭嚴格監控和檢測，是避免此類事件發生的有效辦法。

以上兩款儀器作為華夏科創的明星產品已在全國市場廣泛推廣，我們仍在持續努力的為客戶開發出更好的產品，提供更完善的解決方案，為老百姓的飲食安全健康建起一道屏障。

月旭公司推出乳和乳制品中黃曲霉毒素M1的檢測方案

近日，蒙牛純牛奶被檢測出強致癌物——黃曲霉毒素M1，消息一出頓時又掀起一股食品安全隱患的討論。相比之前的三聚氰胺，黃曲霉素是否更難檢測?月旭公司技術部迅速組織相關技術人員討論和開發應用解決方案，現已整理出全套的專業檢測方案，讓乳和乳制品中黃曲霉毒素M1無處躲藏。

1. 試用范圍

牛奶，奶粉，發酵乳，干酪，奶油等乳制品

2. 方法原理

黃曲霉毒素M1易溶于極性溶劑，因此均勻基質中的黃曲霉毒素M1可以通過甲醇/水震蕩分散提取，對于高脂肪/油含量的樣品基質加入正己烷予以脫脂。本方法采用免疫親和柱凈化，熒光檢測器測定乳制品中黃曲霉毒素M1。

3. 所需設備和耗材

黃曲霉毒素免疫親和柱：Welchrom? IAC (1ml，25支/盒;3ml，15支/盒)(上海月旭提供);

高效液相裝置帶熒光檢測器;

均質機;

水平振蕩器;

SPE轉接頭及50ml大容量上樣器：Welchrom? SPE Adapter(上海月旭提供);

分析天平(精度0.02 g);

SPE裝置帶抽真空系統：Welchrom? SPE Device(上海月旭提供);

黃曲霉毒素M1標準品;

PBS 緩沖溶液：稱取1.16 g Na2HPO4，0.20 g KH2PO4，8 g NaCl和0.2 g KCl 溶于900ml水中，用HCL或NaOH調節pH至7.4，然后定容至1000ml;

甲醇(色譜純);

乙腈(色譜純);

正己烷(分析純)。

4. 樣品前處理

牛奶樣品

稱取25g(精確至0.01 g)混勻的樣品，置于50 mL具塞離心管中，水浴加熱至35℃～37 ℃，6000 r/min下離心10 min。收集全部上清液，待凈化;

發酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)

稱取25 g(精確至0.01 g)混勻的樣品，用0.5mol/L的NaOH溶液調節pH值至7.4，9500r/min下均質5 min，水浴加熱至35℃～37 ℃，6000 r/min下離心10 min。收集全部上清液，待凈化。

乳粉和粉狀嬰幼兒配方乳制品

稱取10 g(精確至0.01 g)樣品置于250 mL燒杯中，加入50 mL約50 ℃的水于乳粉中，玻璃棒攪拌均勻。溶解后冷卻至室溫，移入100 mL容量瓶中，水洗燒杯并轉移洗滌液，用PBS定容至刻度后裝入離心管6000轉/分鐘下離心15 min，混合上清液，取50mL上清液待凈化。

干酪

切取均質的樣品5g(精確至0.01 g)于50 mL離心管中，加2 mL水和30 mL甲醇，9500 r/min下勻漿5 min，超聲提取30 min，6000r/min下離心10 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中，同時加入30 mL正己烷，振搖2 min，分層后，棄去正己烷層。重復用正己烷提取2次。提取液減壓濃縮至約2 mL，轉移濃縮液至離心管，燒瓶用甲醇-水溶液(1+4)5 mL分2次洗滌并倒入50 mL離心管中，加PBS溶液稀釋至50 mL，6000r/min下離心5 min，上清液待凈化。

奶油

稱取5g(精確至0.01 g)試樣，置于50 mL燒杯中，用20 mL正己烷將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振蕩30 min后，將全部液體移于分液漏斗中，待分層后，將下層溶液全部移到100 mL圓底燒瓶中，旋轉蒸發儀減壓濃縮至約5 mL，加PBS稀釋至約50mL，待凈化。

5. 免疫親和柱凈化(3cc)

將IAC裝于固相萃取裝置上，接上大體積上樣器，10ml PBS溶液活化柱子，流速保持在2–3 ml/min，確保上樣前柱子保留少量(0.5ml)的PBS溶液，活化液不收集;

將待凈化液加入免疫親和柱，流速不超過5 mL/min，不收集流出液;

用約20ml去離子水淋洗柱子，流速不超過5 mL/min，抽真空1分鐘，不收集流出液;

用1.5ml甲醇洗脫，流速控制在1d/s，收集洗脫液過膜后上機測試。

注：免疫親和柱從冰箱去除需升到室溫后使用

6. 色譜條件：

色譜柱： Ultimate? XB-C18 250 mm x 4.6 mm，5μm(上海月旭提供)

預柱： Ultimate? C18，5μm，ULT5BG18(上海月旭提供)

流動相： 水:甲醇:乙腈=11:4:5

柱溫： 35℃

檢測波長： 發射波長：365nm，激發波長：450nm

進樣量： 100μL

博納艾杰爾黃曲霉毒素M1&B1檢測方案

天津博納艾杰爾科技有限公司，基于自身技術優勢，及對乳品、飼料行業檢測多年來的認知，整合出一套黃曲霉毒素檢測的綜合解決方案，可以提供黃曲霉檢測幾乎全部所需關鍵產品。

目前，關于乳品中黃曲霉毒素、食品中黃曲霉毒素的檢測，有很多標準，GB、SN,歸納起來，多數采用免疫親和柱凈化-HPLC法檢測，以及酶聯免疫吸附法(ELISA試劑盒法)。

博納艾杰爾可以提供整體檢測所需關鍵產品：

類別作用名稱規格

關鍵耗材凈化黃曲霉毒素總量免疫親和柱25支/盒,1mL

關鍵耗材凈化黃曲霉毒素B1免疫親和柱25支/盒,1mL

關鍵耗材凈化黃曲霉毒素M1免疫親和柱25支/盒，1mL&3mL

關鍵耗材凈化Cleanert PEP 固相萃取柱60mg/3mL

關鍵耗材測定Venusil MP C18 液相色譜柱4.6*250mm,5um

關鍵耗材測定黃曲霉毒素ElISA 試劑盒96孔/48孔

關鍵耗材測定黃曲霉毒素總量膠體金快速檢測卡50條/盒

關鍵耗材測定黃曲霉毒素總量膠體金快速檢測卡50條/盒

關鍵耗材測定Venusil MP C18 液相色譜柱4.6*250mm,5um

試劑標品測定黃曲霉毒素混標液體(B1、B2、G1、G2)B1 1ug/ml;B2 3ug/ml;

G1 1ug/ml; G2 3ug/ml

試劑標品測定黃曲霉毒素B1標準品1mg

試劑標品測定乙腈，HPLC級溶劑瓶/4L

特殊器材測定黃曲霉素光化學柱后衍生反應池臺

儀器測定島津10AVP PIUS HPLC 單泵、單檢測器、工作站帶熒光檢測器

儀器測定微孔板酶標儀450nm/630nm

儀器測定柱溫箱臺

咨詢電話：400-606-8099

郵箱：service@agela.com.cn

常用檢測方法對比：

1 免疫親和柱-熒光分光光度法和免疫親和術-HPLC法

黃曲霉毒素免疫親和柱-高效液相色譜法比傳統的HPLC法更加安全,可靠,靈敏度和準確度高.它采用單克隆抗體免疫技術,可以特效性地將黃曲霉毒素或其他真菌毒素分離出來,分離效率和回收率高，是一種準確定性定量的首選方法。

分析原理試樣中的黃曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液經過過濾,稀釋后,用免疫親和柱凈化,以甲醇將親和柱上的黃曲霉毒素淋洗下來,在淋洗液中加入溴溶液衍生,以提高測定靈敏度,然后將甲醇-黃曲霉毒素淋洗液的一部分注入HPLC中,對黃曲霉毒素 B1,B2,G1,B2分別進行定量分析.免疫親和柱是用大劑量的黃曲霉毒素單克隆抗體固化在水不溶性的載體上,然后裝柱而成.該方法的測定范圍 0-300ug/kg.

參考案例：中草藥酸棗仁中黃曲霉毒素的檢測

2 酶聯免疫吸附法(ELISA法)

原理:將已知抗原吸附在固態載體表面,洗除末吸附抗原,加入一定量抗體與待測樣品(含有抗原)提取液的混合液,競爭培養后,在固相載體表面形成抗原抗體復合物.洗除多余抗體成分,然后加入酶標記的抗球蛋白的第二抗體結合物,與吸附在固體表面的抗原抗體結合物相結合,再加入酶底物.在酶的催化作用下,底物發生降解反應,產生有色物質,通過酶標檢測儀測出酶底物的降解量,從而推知被測樣品中的抗原量.

ELISA方法通常用于大規模的篩選，由于其高同量的特點，是一種性價比很高的測試方法。

3一步式黃曲霉毒素檢測膠體金試紙法

一步式黃曲霉毒素檢測膠體金試紙法是利用單克隆抗體而設計的固相免疫分析法.由此產生的一步式黃曲霉毒素快速檢測試紙可在5—10分鐘完成對樣品中黃曲霉毒素的定性測定.借助黃曲霉毒素標準樣品,這種方法能估算黃曲霉毒素的含量,非常適用于現場測試和進行大量樣品的初選.