人Dickkopf related protein 1 (DKK-1)ELISA試劑盒
(用于血清、血漿、細胞培養上清液和其它生物體液內)
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 DKK-1 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 DKK-1與單抗結合，加入生物素化的抗人DKK-1，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合，加入底物工作液顯藍色，最后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，DKK-1濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中DKK-1濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標板（Coated Wells） | 96孔 | 酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
10×標本稀釋液（Sample Buffer） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） | 50ml |
標準品（Standards）：40ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
第一抗體工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 終止液（Stop Solution） | 12ml |
準備試劑與收集血樣
1. 收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復凍融。血清、血漿作1：2稀釋（取100ul，加標本稀釋液100ul,稀釋2倍）。細胞培養上清可以不做稀釋直接檢測。
2. 標準品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成40ng/ml的溶液。設標準管8管，第一管加標本稀釋液900ul，第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在第一管中加入40ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。
3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測程序
1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
3. 每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2. 以標準品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。
3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應DKK-1含量，再乘上稀釋倍數即可。
試劑盒性能
1. 靈敏度：最小的DKK-1 IlluminaProteinPrep可檢測9,500種獨特的人類蛋白質靶標，為蛋白質生物學提供全新洞察，推動疾病治療新發現早期試用客戶充分認可了其大規模檢測能力、高度一致性以及簡便的“從樣本到洞察”...... 蛋白質作為構成人體組織器官的支架和主要物質，在人體生命活動中起著重要作用。蛋白質的相互作用能產生許多效應，如形成特異底物作用通道、生成新的結合位點、失活、作用底物專一性和動力學變化等，細胞的代謝、信號...... 天然免疫應答是機體應對病原微生物入侵的第一道防線，在殺傷病原微生物、清除感染細胞和維持體內穩態等方面發揮關鍵作用。蛋白質翻譯后修飾（proteinpost-translationalmodificat...... 脂滴是一種具有中性脂質核心的膜性細胞器。與其他膜性細胞器的根本區別就是脂滴由單分子磷脂膜包被，而其他膜性細胞器由雙分子磷脂膜與外界隔離。脂滴最早由列文虎克于1674年在牛奶里發現，是人類最早發現的膜性...... 分析測試百科網訊隨著生命科學產業的數字化轉型和向精密醫學的推進，集成以增強SCIEX高分辨率精確大眾平臺的快速數據處理能力繼續推動數據需求。生命科學分析技術領域專業企業——SCIEX宣布與蛋白質特性質...... 分析測試百科網訊2016年12月2日，2016年北京色譜年會在北京日壇賓館舉辦，本屆色譜年會的主題是“色譜與健康”，各位專家帶來了生命過程、疾病診斷與治療、環境影響、情感因素、激素與藥物等方面色譜技術...... 新春伊始，馬力全開！納微科技為您重磅推出ProteinA親和層析介質新品，讓您領略納微新一代層析介質的超凡魅力！納微科研人員經過多年的積累，利用自主知識產權研發出新一代ProteinA親和層析介質Un...... 2014年6月17日，Bio-Techne宣布以3億美元現金收購ProteinSimple公司。此次收購并不受任何融資不時之需。該交易將通過現金及信新的循環信用額度設施，Bio-Techne預計將收購......
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