從脂肪組織提取蛋白的方法

從培養的細胞和組織中提取總蛋白是實驗室非常常見的實驗步驟，從大多數類型的細胞和組織中提取總蛋白比較容易，但是從脂肪組織中提取高質量和高濃度蛋白質是非常困難的。脂肪組織有白色和棕色脂肪兩種類型，被稱為白色脂肪組織（WAT）和棕色脂肪組織（BAT）。

脂肪組織中含有許多脂滴，蛋白質含量小于細胞總數的 2%。低蛋白含量使得從脂肪中分離高濃度蛋白ji具挑戰性。以下是幾種從脂肪組織中提取蛋白的方法：

A.RIPA 緩沖液提取法：脂肪組織通過含有表面活性劑的緩沖液（例如 RIPA 緩沖液）勻漿，離心后，收集脂肪層下的液體組分為蛋白質，這種方法是相對簡單的，但是蛋白質的產量非常低，因為表面活性劑經常導致蛋白質形成微小顆粒導致蛋白丟失。

B. 有機溶劑萃取 TCA 沉淀法：有以下三種方法：

1）脂肪組織通過蔗糖密度梯度離心，丙酮中加入三氯yi酸（TCA）-20℃ 過夜沉淀蛋白。

2）脂肪組織用有機溶劑提取液裂解（氯仿和甲醇的混合物），也如上用 TCA 沉淀。

3）脂肪組織用有機溶劑提取液（TEF 和氯仿）勻漿，通過離心將水相和氯仿相 分離，將其上的水相和交界面去除，并通過離心蒸發干燥。以上三種方法的共同問題是操作繁瑣，產量低。

C. 離心管柱提取法：這種方法利用了一種新的蛋白質提取技術，脂肪組織通過無表面活性劑的緩沖液勻漿，水油乳狀液通過簡單的冷凍后，離心使其通過特殊的離心管柱（有孔徑，表面性質被處理過的）提取。