免疫熒光補體法實驗

實驗方法原理 用特異性抗體和補體的混合液與標本上的抗原反應，補體就結合在抗原-抗體復合物上，再用抗補體的熒光抗體與補體結合，從而形成抗原抗體補體復合物-抗補體熒光抗體復合物，在熒光顯微鏡下呈現陽性熒光的部位就是免疫復合物存在處，此法常用于腎穿刺組織活檢診斷等。

實驗材料 抗補體熒光抗體

試劑、試劑盒 PBS甘油

實驗步驟

1. 標本處理與直接法相同→將適當稀釋的抗體及補體等量混合滴于切片上，將標本放入濕盒中37℃作用30min→用PBS洗2次，每次5min，攪拌或振動，吹干→滴加適當稀釋的抗補體熒光抗體，在37℃中染色30min→用PBS洗2次，每次5min，振動，蒸餾水洗1min→甘油緩沖液封片，熒光顯微鏡下檢查。

2. 對照染色

可作抗原對照、抗血清對照和滅活補體對照，將補體經56℃、30min滅活處理后，按補體同樣稀釋倍數與抗體等量混合，進行補體法染色結果陰性。

其他

免疫熒光法目前多用于臨床檢驗：

1. 檢測組織內免疫球蛋白或免疫復合物，如腎炎之腎穿刺標本、紅斑狼瘡之皮膚組織等；

2. 檢查血液內自身抗體，此時常用小鼠的 組織標本作為抗原，滴加病人血清后，用帶有熒光素的抗人免疫球蛋白抗體作間接免疫熒光法；

3.細胞表面抗原鑒定，適用于腫瘤細胞、淋巴細胞等，可在管內懸浮 狀態標記染色后轉移至玻片上觀察，或用流式細胞儀（FCM）進行分類、定量計數；

4. 熒光示蹤研究。