實驗方法篇組織切片免疫熒光

組織切片免疫熒光實驗步驟 徐索文 1.切片自然晾干
2.復水5-10min
3.PBS 5min 3次 4.4%PFA 4度固定30分鐘或者冷丙酮4度固定10分鐘 5. PBS 5min 3次 6. 濾紙吸干，用免疫組化筆在切片周圍畫圈
7.1% triton X-100透膜 10min
8. PBS 5min 3次
9.血清封閉30min
10.傾去血清(勿洗)，濕盒內37度孵育1小時或4度過夜 11.室溫復溫1h（防止掉片）
12. PBS 5min 3次
13.濕盒內37度孵育1小時（避光） 14. PBS 5min 3次 15.DAPI或Hoechest復染細胞核10分鐘，PBS漂洗兩次，5分鐘/次
15.甘油封片，指甲油封固，移熒光顯微鏡或Confocol觀察   Notes： 1.      切完片后，室溫下放置30分鐘，然后冷丙酮固定，4度，10分 鐘。讓切片充分貼片，而不至于脫片。一般發生脫片，背景會很重。 2.      片厚小于10um，越薄越好，否則激發光都消耗在片子的底部，而物鏡觀察的上部激發不明顯。 3.      血清封閉10-30分鐘，阻斷非特異結合點。具體阻斷時間，可根據預實驗的結果來調整。 4.      注意調節一抗、二抗的濃度和孵育時間，做好預實驗。 5.      孵育后，PBS充分洗滌，5-10分鐘，3次。 6.      最好選擇單抗，如果是多克隆抗體，很可能會有較多的非特異著色點。 7.      二抗孵育及后續洗滌過程過程中，注意避光。