關于基因擴增技術—聚合酶鏈反應的引物介紹

　　基因擴增技術—聚合酶鏈反應結果的特異性取決于引物的特異性，擴增產物的大小也是由特異引物限定的。因此，引物的設計與合成對PCR的成功與否起著決定性的作用。合成的引物必須經聚丙烯酰胺凝膠電泳或反向高壓液相層析（HPLC）純化。因為合成的引物中會有相當數量的“錯誤序列”，其中包括不完整的序列和脫嘌呤產物以及可檢測到的堿基修飾的完整鏈和高分子量產物。這些序列可導致非特異擴增和信號強度的降低。因此，PCR所用引物質量要高，且需純化。凍干引物于-20℃至少保存12-24個月，液體狀態于-20℃可保存6個月。引物不用時應存于-20℃保存。

　　基因擴增技術—聚合酶鏈反應反應中引物的量也影響PCR擴增效果，當PCR引物量太低，則產物量降低，會出現假陰性。引物濃度過高會促進引物的錯誤引導非特異產物合成，還會增加引物二聚體的形成。非特異產物和引物二聚體也是PCR反應的底物，與靶序列競爭DNA聚合酶，dNTP底物，從而使靶序列的擴增量降低。一般認為PCR反應中引物的終濃度為0.2～1μmol/L為宜，但我們實驗發現，最適濃度遠遠低于此濃度。