在等電點時,蛋白質分子以兩性離子形式存在,其分子凈電荷為零(即正負電荷相等),此時蛋白質分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥,分子相互之間的作用力減弱,其顆粒極易碰撞、凝聚而產生沉淀,所以蛋白質在等電點時,其溶解度最小,最易形成沉淀物。等電點時的許多物理性質如黏度、膨脹性、滲透壓等都變小,從而有利于懸浮液的過濾。在等電點外的所有其他pH值,依據蛋白質所帶凈電荷采用電泳和離子交換層析來分離和分離純化該蛋白質。
等電點沉淀主要應用于蛋白質等兩性電解質的分離提純,還可應用于大豆異黃酮的分離:用等電點沉淀法脫去蛋白質,可提高異黃酮制品的純度,異黃酮截留率為7.2%,蛋白質截留率為91.1%。
大豆蛋白質在pH4.5左右達到等電點,此時其溶解度最低形成沉淀,利用這個性質來提取大豆分離蛋白,使大豆分離蛋白從提取液中聚沉下來,與其他可溶性物質分離。大豆分離蛋白不是在所有酸性條件下都沉淀,只有在等電點附近才沉淀,當pH調太低時溶解度反而升高,到pH2.5時,已沉淀的蛋白質就會幾乎全部重新溶解,因此必須嚴格掌握酸沉所需的pH,才能有滿意的效果。在分離中,大量的含磷化合物的存在是影響蛋白質提取的較大因素,最好除去植酸,可用透析法,也可根據蛋白質和植酸的溶解度的差異性將其除去。
大豆分離蛋白的一般工藝是用50℃溫水萃取并離心,把豆渣用50℃溫水和NaOH調整pH9進行二次萃取,并離心分離把分離出的豆漿進行酸沉,同時攪拌(60r/min),加入2%消泡劑和溫水,加入適量亞硫酸鈉調pH7左右,進行高速攪拌(120r/min)并加入3.5%HCL調至pH4.5,此時蛋白質在等電點開始沉淀,并經過一系列的工藝凝乳分離、均質、中和、殺菌干燥得成品。
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