0.1mg鬼筆環肽溶于1ml無水甲醇(也可用DMSO或無水乙醇溶解)配成貯存液,可在-20度避光的條件下長期保存,工作液的濃度為5ug/ml,由貯存液加生理鹽水PBS稀釋20倍即可。
一、染色程序
1、生理鹽水PBS清洗細胞2次,每次10分鐘;
2、3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分鐘,生理鹽水PBS清洗細胞2次;
3、加入5ug/ml的FITC-鬼筆環肽室溫染色30-60分鐘,夏季時間可以短一些,生理鹽水PBS清洗細胞2次;
4、DAPI或hoechst33258染細胞核10分鐘,生理鹽水PBS清洗細胞2次;
5、吸去多余水分,加熒光封片液(中性或偏堿性緩沖液加等量甘油),蓋上蓋玻片,熒光或共聚焦顯微鏡下觀察。
二、注意事項
1、鬼筆環肽的分子量小,很容易通過細胞,不需要對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。
2、藥品價格昂貴,0.1mg的售價接近兩千元,要節約使用。
3、毒性較大,戴上手套操作。