冰凍切片固定實驗

冰凍組織

PFAPBS乙醇

加濕盒

1.  將承有切片的載玻片放入加濕盒中，加4%PFA覆蓋整個切片，蓋上加濕盒，如為預先未固定過的組織，則于室溫放置20 min，如是固定過的組織則放置5 min。

2.  吸去固定液，用毛細吸管或用噴水瓶以3xPBS沖冼切片，并溫育5 min。

3.  用1xPBS重復步驟2操作，吸去PBS，按順序以30%、60%、80%、95%和100%乙醇依次沖洗切片，每次2 min。

4.  晾干載玻片并保存在放有干燥劑的密封盒中，于-70℃存放可達數周。開盒前應將其平衡至室溫。
 

圖一、加濕盒

1. 固定及時是冷凍切片制作的第一要 素 ,固定的最佳時機應在切片后馬上將裱好組織切片的載玻片放進固定液中固定。固定液要保持新鮮，經常更換。

2. 甲醇固定時間快 ,細胞收縮小 ,對細胞核和抗原保存較好。缺點是揮發性強 ,毒性較大。95%乙醇是兼有脫水作用的固定液 ,滲透力弱 ,固定速度慢 ,對糖原蛋白固定效果較好 ,能溶解脂類 ,易造成組織細胞收縮。丙酮能使蛋白沉淀 ,滲透力強 ,細胞收縮嚴重 ,對細胞核固定相對較強 ,對酶的固定較好 ,作用相當于乙醇 ,對糖原沒有固定作用。AF液是乙醇和甲醛液混合的固定液 ,兼有乙醇和甲醛液的作用 ,固定的同時有脫水的作用。AAF液與 AF液固 定液作用相似 ,固定同時有脫水作用。因其中多了冰醋酸成分 ,故能迅速固定染色質 ,且固定效果均勻 ,還能抵消一部分乙醇對組織的收縮作用。