準確檢測血清血漿樣本中microRNA的利器與應用

　　大量研究表明，血液循環中的microRNA表達變化指征著疾病的發生和發展階段。同時，血液樣品在臨床易于獲取，且穩定不易降解，因此對于microRNA標記物篩選具有廣闊研究前景。

　　血清/血漿樣本用于microRNA研究的挑戰

　　? 血清血漿中不包含細胞，且microRNA含量低

　　? microRNA高度同源，例如hsa-let-7家族各成員

　　? 紅細胞破裂發生溶血后，會釋放抑制RT和PCR反應的物質

　　? 常規內參(如U6等)在血清血漿中含量不穩定，不適合作為內參對照基因

　　準確檢測血清/血漿樣本microRNA的利器

　　丹麥Exiqon 公司miRCURY LNA? Universal RT microRNA PCR芯片，將芯片的高通量優勢與PCR的準確靈敏特點完整結合，實現對血清血漿等各種臨床樣本中的microRNA準確特異檢測：

　　? 基于LNA?ZL技術;獨特的Universal RT反應

　　? 康成microRNA研究技術服務超過8年，客戶SCI文章60余篇，平均影響因子5.5分

　　Human Serum/plasma panel(168 microRNA)

　　專為精確檢測血清血漿中microRNA設計，可直接用于microRNA標記物篩選

　　- 重復性好：血漿樣本，兩次獨立實驗，相關系數R2達到0.96(圖一)

　　- 特異性強：區分單堿基差異microRNA;區分成熟microRNA和前體

　　- 靈敏度高：準確檢測血清血漿中microRNA，檢測限低至5個拷貝

圖一 血漿樣本PCR panel重復性實驗

最低僅需20μL的血清/血漿樣本，即可實現168個microRNA準確特異檢測

- 獨特的Universal RT反應：一次逆轉錄制備的cDNA可作為所有microRNA PCR反應的模板
- RNA需求量少，特別適合血清/血漿檢測，最低于僅需20μL血清/血漿樣本（圖二）
- 統一逆轉錄，簡化實驗步驟，消除技術誤差，提高準確性
- 所含168個microRNA，基于大量文獻數據和Exiqon長期積累的豐厚研究成果

圖二 血清/血漿樣本中miRNA檢測結果

嚴格的質控系統，保障實驗結果可靠性

- 溶血判定：實驗前用Nanodrop檢驗樣本溶血情況，避免抑制PCR的物質
- 評估RT反應效率：RT反應設置Spike-in
- 監測PCR反應過程：PCR芯片內設陽性對照
- 擴增結果判定：采用SYBR green的PCR方法，可根據溶解曲線判斷擴增特異性
- 內參設置：選擇血清血漿中穩定高表達的microRNA（miR-423-5P等）為內參，校正數據

Exiqon已在數千例癌癥、免疫病等病人的血清/血漿中進行了microRNA篩查和驗證