（二）凝血酶原時間（PT）的推薦方法
[原理]
將組織凝血活酶（主要含組織因子和脂質）和鈣離子，加到枸櫞酸抗凝血漿中，在37℃保溫，測定血漿凝固時間，即為PT。PT主要用于篩選檢測外源凝血系統的因子Ⅶ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ和相關因子的抑制物的試驗。
[標本來集和處理]
1.標本采集：用硅化或塑料注射器抽取空腹靜脈血，按9:1比例加入含0.109mol/L的枸櫞酸鈉抗凝劑的硅化或塑料試管中，輕輕混合均勻。
2.標本處理：以2000～2500g，離心15分鐘，分離乏血小板血漿，并在24小時內完成試驗。
3.正常對照血漿：選擇正常健康男性和女性各lO名以上，年齡在18～45歲。但不能是妊娠、月經期、哺乳期和口服避孕藥的婦女，采取的血漿冰凍干燥保存或-80℃保存。
[試劑]
1.抗凝劑：109mmol/L枸櫞酸鈉液（相當于含二分子結晶水的枸櫞酸鈉32g/L）。
2.凝血活酶試劑：市售商品，應標有ISI、批號及有效期。凍干者應按說明書加指定的緩沖稀釋劑復溶。
3.氯化鈣（CaCl2）溶液：為25mmol/L。（目前有些商品試劑已將凝血活酶液與氯化鈣液混合好，可不必另配CaCl2液）。
4.質控物：正常及異常對照血漿
5.配制試劑用水必須符合1級純水的標準。
[儀器]
1.手工法：秒表，保持37℃±1℃的恒溫水浴箱或電熱塊。水深能浸試管3cm以上，表面無劃痕的10×mm拭管。經標準的0.1mL移液管。經校正的秒表。
2.儀器法：各種自動或半自動血凝儀，嚴格按說明書操作。
[操作步驟]
1.手工法
（1）測定溫度36.5～38.5℃，上述各試劑及被測血漿，均應預溫至此一溫度，但凝血活酶試劑預溫不可超過30分鐘，血漿預溫一般不宜超過10分鐘。
（2）所用試管及加樣器等接觸血漿的器具均為塑料或硅化玻璃管。
（3）吸取枸櫞酸抗凝血漿0.1mL，加入一小試管中：加入凝血活酶試劑0.1mL混勻后置37℃水浴中。再加入25mmol/L
CaCl2液0.1mL，（也可先將凝血活酶試劑與CaCl2溶液等量混合，加入0.2mL）。立即混勻并開動秒表：試管仍浸于水浴中，至約10秒鐘時，自水浴中取出，在紗布上迅速擦去試管外水滴，在明亮處不斷傾斜試管，在流動狀態下觀察有無纖維蛋白形成。一旦見到纖維蛋白（同時將出現液體流動減慢），立即停表，記錄時間。每次測定二管，按平均數報告。本試驗的最后混合液其pH應為7.2～7.3，大部分商品凝血活酶試劑均用含緩沖液的溶液配制。
（4）每批均同時做正常和異常對照，方法應與測定標本完全相同。
[報告方式]
1.以PT的秒（S）數報告（最接近的0.5秒）
2.以患者血漿（S）/正常對照PT（S）的比率（PRT）報告。
3.在口服華法令類抗凝藥物治療監控時，應報告國際正常化比率（INR）。大部分自動化儀器可根據所測的PTR和凝血活酶試劑的ISI，自動算出INR。手工法可根據下列公式，用一計算器直接計算：
Poller設計了一個簡便的列線圖，在取得PTR和ISI值后，即可從圖上直接查找出INR值，十分便利，國內已有介紹。
ICSH規定，不再用稀釋曲線或百分比（活動度）報告。
[參考值]
因儀器/試劑不同，會得出不同結果，故很難統一規定參考值。各實驗室應根據自己的儀器、試劑等條件，自行測定一批健康人，建立參考值。此后至少每年或當條件有變化時，根據新的條件，重新建立。參考值PT測定的一切條件均應與患者血漿PT測定相同（包括采血、容器、抗凝劑等）。健康供血者應選至少20個18～55歲的男性和非妊娠、月經期女性，不可服藥，在平靜休息狀態采血、以減少個體差異（有條件時，可測一批老年人和小兒，分開統計）。同時應分開幾天采血和測定，以減少天間差異。測定結果經統計學處理，計算標準差：以兩個標準差（2SD）或95%可信限作為參考范圍。對于三個標準差是正常還是異常，需結合具體情況進行評估。從統計學上講，其中有些人是正常的。用以上標準，病人（PT異常）則很少會遺漏。
三、活化部分凝血活酶時間(APTT)的標準化
（一）活化部分凝血活酶時間(APTT)的標準化
APTT是檢測內源凝血系統諸凝血因子缺陷和相關抑制物的篩選試驗，也是當前用于凝血因子、肝素抗凝治療以及狼瘡抗凝物質檢測的主要手段。
與PT測定一樣，不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時間對各種凝血因子缺陷、對肝素和對狼瘡抗凝物質的敏感性相差很大。例如，檢測APTT的試劑中，所用活化劑（白陶土、硅藻土、鞣花酸）不同，他們對檢測肝素、狼瘡抗凝物質和因子Ⅷ、Ⅸ的敏感性不同。
迄今，ICSH和ICTH尚未有APTT檢測方法標準化或試劑標準化的可行方案問世，僅NCCLS于1992年，提出一個編號為H29-T的暫行方案。
（二）活化的部分凝血活酶時間（APTT）的推薦方法
[原理]
將一種磷脂和激活劑加到血漿中，經過孵育后，加入適當濃度的鈣離子。其纖維蛋白凝塊形成的時間（以秒計），即為APTT。本法主要用于過篩測定內源途徑凝血因子的缺陷，如因子Ⅶ、Ⅺ、Ⅷ、Ⅸ、激肽釋放酶原（PK）、高分子量激肽原（HMWK）以及纖維蛋白原等。同時也用于上述因子的抑制物測定、肝素治療的監測以及狼瘡抗凝因子的檢查。
[儀器]
本實驗所用儀器、設備（包括采血、貯血容器、加樣裝置和標本的處理等）以及對它們的要求完全與PT相同。PT所用自動化儀器同樣適于本實驗。
[試劑]
1.部分凝血活酶試劑：由商品供應。一般已與檄活劑按比例配在一起（或分開配制）常用的激活劑由硅藻土（商品名Celite）、白陶土、二氧化硅微粒、鞣化酸（ellagic acid）或其它可用的激活劑，由廠方配套供應。
APTT試劑/儀器結合，應能使因子Ⅷ、Ⅸ或Ⅺ活性低于0.3μ/mL（或＜30%）的血漿，出現異常延長的結果。
2.氯化鈣溶液（25mmol/L）以及其它試劑與PT所用者相同。
[操作步驟]
1.樣品的采取、貯存、輸送與PT測定相同。注意，應用清潔的塑料或硅化玻璃采血器采血及貯血。
2.標本（去血小板的血漿）的制備與PT相同。注意、應用去血小板血漿測定。
3.水浴箱或電熱板的溫度為37℃±1℃，要經常檢查是否正確。
4.接觸活化時間：加激活劑活化因子Ⅻ的時間要保持一致；各儀器和試劑生產廠家的規定可能不一樣，應嚴格按說明書要求進行。手工操作時，應用秒表或類似的定時裝置計時。
5.操作：預溫（不超過30分鐘）APTT試劑一份與預溫（不超過10分鐘）的侍測血漿一份混合，立即開動秒表計時；至規定的接觸活化時間終點時，加人預溫37℃的CaCl2液一份，混勻，同時開動秒表。至出現血漿凝固時，停表，記錄血漿凝固時間（以秒計）。手工測定時應同時測定兩管，按平均數報告。一些精密度已有很大改進的自動或半自動凝血儀，如果有適當的質控標準也可只測定一次。應同時測定正常和異常對照血漿。
[參考值]參照PT
[特殊解釋]
1.對肝素的敏感性：APTT常用于肝素治療的監測，通常以患者APTT與正常血漿APTT的比率在1.5～2.5作為治療控制范圍：但不同的試劑/儀器系統對肝素的敏感性不同。其試劑/儀器系統對肝素的敏感性可進行測定。體外的敏感性（in
vitro sensitlvity）是指將臨床在使用的同類型釣肝素按其治療濃度，加到正常血漿中，測定APTT。體外敏感性與體內敏感性（in
vivo sensitivity）不等同，但可作參考。
2.浪瘡抗凝因子：狼瘡抗凝因子是一種抗磷脂的自身抗體，由于它抗凝血的重要成分磷脂，故能干擾凝血。血中如存在狼瘡抗凝因子，APTT將延長。但APTT試劑對狼瘡抗疑因子的敏感性有很大差別，試劑制造廠家應提供足夠的說明，有關的國家機構也可提供對狼瘡抗凝因子的資抖。但要知道，病人個體之間也有很大差異，沒有一種試劑能測出所有狼瘡抗凝因子。
四、纖維蛋白原測定（Fg）的標準化
（一）纖維蛋白原測定（Fg）的標準化問題
纖維蛋白原（死）由肝合成，存在于血漿和體液中，其結構和功能基本已搞清，但迄今仍無理想的臨床檢測方法；文獻報道的測定方法多至10余種，有的精密度、準確信較好，但過于復雜、煩瑣；有的雖然簡便、快速，但精密度、準確性較差。
1992年，英國國家生物標準及控制研究所（NIBSC）、研究完成了一個纖維蛋白原標準品，編號為89/644，向WHO的生物標準專家委員會（ECBS）推薦，[15]并被ECBC批準為國際參考品（IRP）。從此，各國均引進這一標準品來標化本國或廠家生產的次極標準品（我國衛生部臨床檢驗中心亦已在引進）。使纖維蛋白原測定的標準化工作，走出了關鍵的一步。因此根據調查，各家標準品纖維蛋白原含量差別很大。
（二）纖維蛋白原（Fg）測定的推薦方法
各家用IRP來標化自己的標準時，推薦采用Jacobsson的改良法，現將該法介紹如下。
[試劑]
1.緩沖液：Na2O·2H2O 0.882g；KH2PO4 2.77gl升，此為貯存緩沖液；將貯存緩沖液l份，加生理鹽水2份即為應用緩沖液，pH為6.35。
2.生理鹽水：0.15mol/L
3.人或牛凝血酶：500IU/mL，生理鹽水溶液。
4.凝塊溶解劑：尿素400g溶于少量蒸溜水中，200mL 1.Omol/L NaOH，再加水至l升。
[操作步驟]
將纖維蛋白原凍干（標準）品（源于89/644）加lmL蒸餾水復溶，加到含有2mL應用緩沖液的有機玻璃淺盤或其他容器中，再加入凝血酶液50μL，迅速混勻，在室溫中靜制置2小時。將容器倒扣于吸水的布上（其下可墊吸水紙），再用適當物質（加濾紙）將凝塊吸干。將凝塊取下，置于5OmL生理鹽水中洗滌2次，每次洗滌后均應將凝塊吸干（可用玻璃擠壓凝塊），盡量除去含于凝塊中的液體，以免液體中的其它血漿蛋白殘留。必要時可在清潔棉布上擠壓。
小心將凝塊加人含凝塊溶解劑7.5mL的容器中，搖勻，直至凝塊完全溶解。倒人光徑為1cm的比色杯中，以凝塊溶解劑為空白，在280nm和315nm波長讀取吸光度（A）。
[計算]
纖維蛋白原濃度（g/L）
式中15.87為纖維蛋白在堿性條件下波長280nm的消光系數；7.5為纖維蛋白原的稀釋倍數。
當A在1.0以下時，吸光度與濃度呈線性關系。如A大于1.0，應稀釋標本重新測定，重新乘稀釋倍數
（三）適用的纖維蛋白原（Fg）測定（Clauss法）
[原理]
將凝血酶加到血漿中，使纖維蛋白原變成纖維蛋白，血漿便出現凝固。在有足量的凝血酶時，與不同含量的纖維蛋白原作用，其出現血漿凝固的時間與纖維蛋白原含量呈負相關。
[試劑]
1.牛凝血酶l00NIHU/mL
2.纖維蛋白原標準品（IRP次級標準）
3.緩沖液（下列兩種任選一種）：
（1）巴比妥緩沖液（PH7.5）；巴比妥2.5g，巴比妥鈉2.75g，璐氯化鈉7.3g溶于750mL去離子水中，校正至PH7.5，加水至1L。
（2）咪唑（Imidazole，或Glyoxaline）緩沖液：咪唑3.4g（0.05mol/L），氯化鈉5.85g，加于約500mL水中；加O.1mol/L鹽酸186mL，調PH至7.3-7.4，最后加蒸餾水至1升。
[操作步驟]
1.手工法
（1）用上述緩沖液先將標準品稀釋成0.8，1.6，2.4，和4.0g/L纖維蛋白原濃度，各濃度再用緩沖液作1:10稀釋。
（2）患者血漿及質控物用緩沖液作1:10稀釋。
（3）將含100NIHU/mL，牛凝血酶，混勻后室溫保存。如用儀器法測定，則用100NIHU/mL，牛凝血酶，不必稀釋。
（4）在一試管中，加稀釋血漿0.2mL，置37℃水浴中4分鐘。
（5）加入預溫37℃的lOONIHU/mL凝血酶液O.2mL，搖勻并立即開動秒表，不斷觀察凝固時間。至出現凝固時停表。
（6）每份標本測定兩次，求平均數。同時測定各標準管和對照（質控）管，方法相同，準確記錄時間。
（7）計算：用雙對數紙作圖，以凝固時間為縱坐際、纖維蛋白原濃度為橫坐標，將各相應濃度的標準管對凝固時間，在圖上標出相應的點并連成直線，制成標準曲線。然后根據患者和質控血漿所測得的凝固時間。在圖上查到纖維蛋白原含量。
如血漿纖維蛋白原含量大于4g/L，應稀釋血漿后重測，結果乘以稀釋倍數。如血漿纖維蛋白原含量低于O.8g/L，需將原血漿改為1:2或1:5稀釋，在標準曲線上查得結果后除以5或除以2。
2.儀器法：本法可用自動或半自動凝血儀按凝血酶時間（TT）測定法測定。可自動打印出結果。一般儀器法比手工法精密度高.