動物實驗技術2

2．于第①、②、③管內分別加乙型溶血性鏈球菌培養物、四聯球菌培養物、生理鹽水各0.5m1。

3．上述3支試管每管加入5%氯化鈣0.2ml，搖勻，置37℃水浴10min，待血液凝固，再繼續37℃水浴約30min，觀察結果。

【結果】

l．觀察時，可將小試管慢慢傾斜至30°，輕輕搖動。凡凝固血塊又發生溶解，出現液體者，為鏈激酶試驗陽性，否則為陰性。

2．本試驗①管為陽性，②管為陰性，③管為陰性對照，無液體出現。

（四）莢膜的致病作用

【材料】

1．菌種：Ⅲ型肺炎鏈球菌。

2．小白鼠。

3．無菌lml注射器和針頭。

4．莢膜染色液。

【方法】

1．取20g左右重的健康小白鼠1只，腹腔或皮下注射肺炎鏈球菌菌液0.5m1，飼養觀察

2．待瀕臨死亡時，及時解剖，取血接種血平板，作細菌培養。

3．取其腹腔液涂片，作莢膜染色鏡檢。

【結果】

1．有毒力的肺炎鏈球菌，能使小白鼠在12～36h瀕臨死亡。

2．血培養可獲肺炎鏈球菌純培養物。

3．有毒力的肺炎鏈球菌，莢膜染色鏡檢，可見有明顯的莢膜。

四、外毒素的致病作用

【材料】

1．小白鼠。

2．破傷風梭菌培養物(破傷風外毒素)。

3．無菌lml注射器和針頭。

【方法】

將破傷風梭菌接種庖肉培養基，37℃培養48h，吸取上清液，3000r/min離心30min，棄去沉渣。臨用時作1∶100稀釋。

1．試驗組：取小白鼠1只，于一側后腿肌肉注射破傷風梭菌濾液0.2～1.0ml。

2．對照組：取1只小白鼠，于一側肌肉注射破傷風抗毒素l00u，30min后，于另一側肌肉注射0.2～1.0ml破傷風桿菌培養濾液。

【結果】

逐日觀察，實驗組小白鼠的后腿及尾巴強直性痙攣，繼而延及全身，動物全身痙攣，2d內死亡。此為毒力試驗陽性。對照組小白鼠仍健康存活。

五、內毒素的致病作用

【材料】

1．腦膜炎奈瑟菌內毒素。

2．小白鼠。

3．無菌1ml注射器和針頭。

【方法】

1．取腦膜炎奈瑟菌18～24h培養菌液，60℃加熱5～10min，殺死細菌，成為粗制的內毒素。

2．取20g左右重的健康小白鼠1只，將其固定，暴露尾巴，用酒精反復擦拭，使尾部血管充血。

3．取上述處理的菌液1ml，注入小白鼠尾靜脈。

4．約5h后，用頸椎脫位法殺死小白鼠，解剖觀察。

【結果】
可見皮下彌散性紫瘢，肝臟淤血水腫，腎臟及腎上腺充血，腸系膜及腹壁血管明顯充血