動物組織基因組DNA提取試劑盒使用說明（一）

動物組織基因組DNA提取試劑盒

一、簡介

動物組織基因組DNA提取試劑盒(DePure Tissue DNA Kit)適用于動物組織、培養細胞、抗凝血液、體液、分泌液等生物樣品的DNA提取。試劑盒基于硅膠柱純化技術，提取過程中無需使用有毒的酚氯仿抽提，也無需進行耗時的醇類沉淀，整個提取過程只需30分鐘（不含消化時間）。動物組織基因組DNA提取試劑盒一次可處理1~20mg組織樣品、1~200μl抗凝血液或體液樣品、5×10⁶個培養細胞，得到的DNA可直接用于PCR、Southern blot、LAMP、Real-Time PCR等下游實驗。

二、原理

動物組織基因組DNA提取試劑盒基于硅膠柱純化方式。樣品在裂解液(Buffer MTL)和蛋白酶作用下裂解消化，DNA釋放到裂解液中。加入Buffer AL和乙醇后，轉移至柱子中過濾，DNA被吸附上柱子的膜上，而蛋白質則不被吸附而隨溶液濾出去除。柱子經Buffer GW1洗滌蛋白質和其它雜質，經Buffer GW2洗滌去除鹽分，最后DNA被低鹽緩沖液(Buffer AE)洗脫，洗脫的DNA可直接用于PCR、Southern blot、LAMP、Real-Time PCR等下游實驗。

DePure硅膠柱是采用高結合力的玻璃纖維濾膜為基質。濾膜在高濃度離子化劑(如鹽酸胍或異硫氰酸胍)條件下，可通過氫鍵和靜電等物理作用吸附核酸，而蛋白質或其它雜質不被吸附而去除。吸附了核酸的濾膜經洗滌去除蛋白質和鹽，最后可以用低鹽緩沖液(Buffer AE)洗脫出濾膜上吸附的核酸。得到的核酸純度高，可直接用于各種下游實驗。

三、組成

DePure Tissue DNA Kit

四、保質期

動物組織基因組DNA提取試劑盒除Proteinase K外，可在室溫下(15-25℃)干燥保存12個月。長期保存時需置于2-8℃。低溫下，Buffer MTL可能會有沉淀形成，需37℃水浴讓沉淀完全溶解。Proteinase K干粉和RNase Solution室溫運輸，收到試劑盒后請保存于2~8℃或-20℃。

五、需要準備材料和工具

• 無水乙醇(96%-100%)

• 滅菌的離心管和吸頭

• 小型離心機(13,000rpm)

• 水浴鍋或金屬浴

• 按瓶子標簽所示，加入適量的Protease Dissolve Buffer至Proteinase K干粉中至終濃度為20mg/ml，顛倒混勻讓蛋白酶K充分溶解，于-20℃保存。

• Buffer GW1使用前，須按瓶子標簽所示，加入無水乙醇進行稀釋。

• Buffer GW2使用前，須按瓶子標簽所示，加入無水乙醇進行稀釋。