化學發光免疫測定是將抗原與抗體特異性反應與敏感性的化學發光反應相結合而建立的一種免疫檢測技術,最初建立于1976年。
(一)原理
化學發光免疫測定屬于標記抗體技術的一種,它以化學發光劑、催化發光酶或產物間接參與發光反應的物質等標記抗體或抗原,當標記抗體或標記抗原與相應抗原或抗體結合后,發光底物受發光劑、催化酶或參與產物作用,發生氧化還原反應,反應中釋放可見光或者該反應激發熒光物質發光,最后用發光光度計進行檢測。
(二)標記物
1.發光劑直接標記 常用魯米諾及其衍生物等,它們屬環肼類化合物,能與很多氧化物如氧、次氯酸、磺、過氧化物等反應而發光。因此可直接將魯米諾或其衍生物標記抗體或抗原進行CLIA。這類方法特異性強,但往往會因交聯影響發光物特性,降低敏感性。
2.發光催化酶標記 常用辣根過氧化物酶、丙酮酸激酶、葡萄糖氧化酶等標記抗體或抗原。與酶標抗體測定基本相同,差別在于CLIA是用發光性底物指示反應,有人稱為發光酶免疫測定。
3. 標記物產物參與反應 標記物不直接催化發光反應,而其反應產物能使反應系統發光。如用草酸類標記抗體或標記抗原,在有H2O2作用下,生成二噁二酮,后者可使紅熒稀(Rubrene)激化發光。
(三)應用
CLIA特異性強、敏感性高,可檢測到10-5mol/L的抗原量。快速,一般幾十分鐘或1-3小時內完成。操作簡便,可進行固相和均相分析。試驗重復性好,試劑易標準化和商品化。目前已用于多種藥物、激素、病原微生物及其代謝產物、抗體及其他生物活性物質的測定。
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