單克隆抗體捕獲步驟工藝開發的快速入門（一）

發布時間：2020-07-06 14:57 原文鏈接：單克隆抗體捕獲步驟工藝開發的快速入門（一）

在單克隆抗體純化中，為了獲得所需高質量的抗體，一般使用兩步或三步層析步驟。通常，用于三步工藝的層析介質為Protein A→陽離子交換→陰離子交換；用于兩步工藝的層析介質為Protein A→Capto adhere（多模式離子交換）。所有的單克隆抗體（Mabs）都有一些相似的特性，所以可以使用同一個平臺方法純化。請注意，平臺并不意味著相同的工藝，它只是表示工藝的某些方面不需要從頭開始開發，因為可以利用以前單克隆抗體工藝開發經驗。

本次討論的目的是提出一種純化工藝，它可以用于哺乳動物細胞生產的大多數Mabs的純化工藝。這里我們介紹一種基于MabSelectTMSuRe層析介質做工藝開發的一般起始建議（未優化）。

MabSelectTMSuRe 是一種Protein A層析介質，耐受苛刻和具有成本效益的CIP程序，即0.1-0.5 M NaOH。

用于工藝開發的推薦途徑是使用高通量工藝開發(HTPD)--使用PreDictor?96孔板可以在短時間內評估大量的層析參數（參考文獻1）。然后最佳工藝參數被放大，即HTPD→實驗室規模→中試車間→生產。這種方法提供了大量的對于Quality by Design (QbD)方法尤其有用的數據。甚至當使用HTPD時，下一個表格中的一些信息可以作為起點使用。

系統	控制	層析介質	層析柱	床高度(cm)	CV(ml)
?KTA? avant 25或150	UNICORN? 6	MabSelect SuRe	Tricorn? 10/200	20	15.71*

用于MabSelect SuRe捕獲步驟的層析方法

步驟	體積或時間	緩沖液組成	保留時間，分鐘（線性流速，cm/hr）
0.僅在保存后-平衡	3 CV	20 mM 磷酸鈉, 0.15M NaCl, pH 7.4	7.5 (160 cm/hr)
1.平衡	0.25 CV	20 mM 磷酸鈉, 0.15M NaCl, pH 7.4	3.4 (350 cm/hr)
2.上樣	5%穿透時80%的動態載量	按需要	2.4-4.8 (500-250 cm/hr) 長保留時間 → 高結合容量
3.清洗	3 CV	20 mM 磷酸鈉, 0.15M NaCl, pH 7.4	2.4-4.8 (500-250 cm/hr)
4.中間清洗	2 CV	25 mM 磷酸鈉, 0.5M NaCl, pH 7.0, (5%異丙醇, 可選)	3.4 (350 cm/hr)
5.清晰	3 CV	20 mM 磷酸鈉, 0.15M NaCl, pH 7.4	3.4 (350 cm/hr)
6.洗脫	經過紫外檢測器控制或在預先測定的體積處	0.1 M 乙酸, pH 2.9**	3.4 (350 cm/hr)
7.CIP	2 CV=15min	0.1M NaOH	7.5 (160cm/hr)
8.再平衡	3 CV	20 mM 磷酸鈉, 0.15 M NaCl, pH 7.4	3.4 (350 cm/hr)
9.僅在最后一輪運行后-保存	4 CV	20% 乙醇	7.5 (160 cm/hr)