單克隆抗體的制備——克隆和擴增用培養基的制備

實驗步驟	附加材料（其他材料見基本方案 2) 小鼠（以 BALB/c 小鼠為例）， 5 或 6 只， 4?6 周齡，無病原體（有可靠來源，避免支原體感染） 75 cm2 組織培養用細頸瓶 0.45 過濾裝置 1.用頸椎脫臼法或二氧化碳窒息法處死 5 或 6 只小鼠（附錄 2 G; 避免使用麻醉劑）。無菌操作取出胸腺（附錄 2 H) 并制成單細胞懸液（見基本方案2 , 步驟 7?9)。在20m l 添加 lOmmol/L HEPES和 lmmol/L 丙酮酸鈉的DMEM-20完全培養液中重懸細胞。 2.加IOml 胸腺細胞至 75 cm2 組織培養瓶中。以每個胸腺 20m l 培養基的總量加入DMEM-20完全/HEPES/丙酮酸鈉培養液（最多每個培養瓶 60 ml細胞懸液）。垂直放置，培養 4?5d 3.將細胞懸液移至無菌 50m l 錐底離心管中。室溫下， IOOOg 離心 5 min，取上清。0 .45 Mm 過濾上清液。以 IOml 為一個單位，一 20°C 凍存。解凍后，以 1 0 % ?2 0 % 的濃度使用。展

實驗步驟

附加材料（其他材料見基本方案 2)

小鼠（以 BALB/c 小鼠為例）， 5 或 6 只， 4?6 周齡，無病原體（有可靠來源，避免支原體感染）

75 cm2 組織培養用細頸瓶

0.45 過濾裝置

1.用頸椎脫臼法或二氧化碳窒息法處死 5 或 6 只小鼠（附錄 2 G; 避免使用麻醉劑）。無菌操作取出胸腺（附錄 2 H) 并制成單細胞懸液（見基本方案2 , 步驟 7?9)。在20m l 添加 lOmmol/L HEPES和 lmmol/L 丙酮酸鈉的DMEM-20完全培養液中重懸細胞。

2.加IOml 胸腺細胞至 75 cm2 組織培養瓶中。以每個胸腺 20m l 培養基的總量加入DMEM-20完全/HEPES/丙酮酸鈉培養液（最多每個培養瓶 60 ml細胞懸液）。垂直放置，培養 4?5d

3.將細胞懸液移至無菌 50m l 錐底離心管中。室溫下， IOOOg 離心 5 min，取上清。0 .45 Mm 過濾上清液。以 IOml 為一個單位，一 20°C 凍存。解凍后，以 1 0 % ?2 0 % 的濃度使用。