原代細胞培養之取材

　　取材作為原代細胞培養過程中的第一部至關重要，以下幾種取材技術，你都用過哪些方法呢？

　　各類組織取材，操作及注意事項：

　　1.皮膚和粘膜

　　主要取皮片，面積一般2~4平方厘米。

　　2.內臟和實體瘤

　　1）無菌環境；

　　2）熟悉所需組織的類型和部位；

　　3）要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結締組織。

　　3.血液細胞

　　一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等)分離細胞，取材時應注意抗凝。

　　4.骨髓、羊水、胸/腹水細胞

　　嚴格無菌，注意抗凝，還要盡快分離培養，離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養液洗一次后即可培養，不宜低溫存放。

　　5.動物組織取材——鼠胚組織

　　1）用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動物；

　　2）將其浸泡在含有75%酒精的燒杯中，5分鐘后取出動物；

　　3）在消毒過的木板上可用無菌的圖釘或大頭針固定四肢，切開皮膚；

　　4）用無菌操作法解剖取胚。

　　6.動物組織取材——幼鼠胚腎(或肺)

　　幼鼠采用上述方法處死消毒后→腹部朝上固定在木板上，先切開游離毛皮并拉開至兩側→采用無菌法打開胸腔取肺，或從背部打開腹腔取腎。

　　7.雞(鴨)鳥類胚胎組織

　　1）取孵化至適當胚齡(9~12天)的胚蛋，用照蛋燈在暗處燈檢，若有豐富血管、胚體有運動的胚蛋，說明胚體發育良好，并用有色筆劃出氣室和胚體位置；

　　2）將胚蛋置于蛋架上，先用溫水清洗蛋殼，再用75%酒精棉球擦干；

　　經碘酒、75%酒精消毒后，在無菌條件下采用無菌法用剪刀或鑷子打開氣室，沿氣室邊緣去除蛋殼；

　　3）用眼科鑷撕去殼膜，暴露出雞胚；

　　4）用彎頭鑷輕挑起胚頭，取出胚胎，放入無菌平皿中，解剖取材。