原代細胞計數的操作步驟

一、原代細胞計數 

1. 將血球計數板及蓋片用擦試干凈，并將蓋片蓋在計數板上。 

2. 將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數板之間。 

3. 靜置3分鐘。 

4. 鏡下觀察，計算計數板四大格細胞總數，壓線細胞只計左側和上方的。然后按下式計算： 

    細胞數/ml＝4大格細胞總數/ 4×10000 

注意：鏡下偶見由兩個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算，若細胞團占10%以上，說明分散不好，需重新制備細胞懸液。 

二、原代細胞活力 

1. 將細胞懸液以0.5ml加入試管中。 

2. 加入0.5ml 0.4%臺盼蘭染液，染色2一3分鐘。 

3. 吸取少許懸液涂于載玻片上，加上蓋片。 

4. 鏡下取幾個任意視野分別計死細胞和活細胞數，計細胞活力。 

死細胞能被臺盼蘭染上色，鏡下可見深蘭色的細胞，活細胞不被染色，鏡下呈無色透明狀。 

活力測定可以和細胞計數合起來進行，但要考慮到染液對原細胞懸液的加倍稀釋作用。 

三、MTT法測細胞相對數和相對活力 

活細胞中的琥珀酸脫氫酶可使MTT分解產生蘭色結晶狀甲贊顆粒積于細胞內和細胞周圍。其量與細胞數呈正比，也與細胞活力呈正比。 

1. 細胞懸液以1000rpm離心10分鐘，棄上清液。 

2. 沉淀加入0.5－1ml MTT，吹打成懸液。 

3. 37℃下保溫2小時。 

4. 加入4—5 ml酸化異丙醇（定容）。打勻。 

5. 1000 rpm離心，取上清液酶標儀或分光光度計570nm比色，酸化異丙醇調零點。 

注意：MTT法只能測定原代細胞相對數和相對活力，不能測定細胞絕對數。 

附：

1、0.4%臺盼蘭染液配制： 

    臺盼蘭 0.4克 加雙蒸水至100 ml。 

2、MTT配制： 

    MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸緩沖液或無酚紅的基礎液中。4℃下保存。 

3、酸化異丙醇配制： 

    異丙醇中加入HCl使zui終達0.04mol/L。