原代細胞因它可以模仿人體的新陳代謝逐日成為科研學者青睞的研究工具,但是原代細胞曾是出了名的難培養,需要耗費大量的時間、成本和資源。即使細胞捱過了極其嚴苛的解離步驟,但污染仍然是一個隱患,有可能讓幾天的成果化為烏有。此外還存在其他細胞污染、生長緩慢以及數量有限的問題。
細胞系因容易培養且產量可觀而成為研究首選。然而,它們并不完美。細胞系會不斷突變。連續傳代導致它們的基因型和表型發生變化。有時候,它們已經變得面目全非。一個研究小組曾經發現,HEK293細胞系的腺病毒轉化產生的細胞更接近未成熟神經元,而不是人胚腎細胞。
于是hTERT、PSC和iPSC來源的永生化細胞應運而生,他們 并不是真正的原代細胞,但是他們卻能表達出大部分原代細胞應有的特性例如:強制表達hTERT讓原代細胞能維持足夠的端粒長度,避免增殖性衰老。hTERT誘導的原代細胞不但具有連續傳代的能力,而且沒有染色體不穩定性。這種細胞可以擴增,也可以冷凍、保存和解凍,以適應實驗的時間安排,但是它只是延緩了細胞的衰老,增加了傳代的次數,并不是表示細胞可以像hela一樣“長生不老”。
PSC和IPSC也是一樣的,PSC的真正價值在于能夠從一種細胞分化成多種細胞類型。iPSC讓研究人員能夠采集輕松獲取的細胞,并將它們轉變為不易獲取的細胞,但是預實驗和驗證實驗結果一般建議使用原代細胞,因為沒有經任何修飾的細胞才能得到實驗最為精確的數據。
一、原代細胞計數 將血球計數板及蓋片用擦試干凈,并將蓋片蓋在計數板上。 將細胞懸液吸出少許,滴加在蓋片邊緣,使懸液充滿蓋片和計數板之間。 靜置3分鐘。 鏡下觀察......
近日,中國農業科學院飼料研究所科研人員研究創新了一種簡單、快速的鴨胚肝臟原代細胞分離和培養方法,并研究了鴨胚肝臟原代細胞膽堿缺乏模型中的基因可變剪切,為鴨膽堿與基因結構的相關性研究提出了新的見解。相關......
一、貼壁細胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內舊培養液。2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動培養瓶,使瓶底細胞都浸入溶液中。3、消化2-5分鐘后把培養瓶放置在顯微鏡下進行觀察,發......
取人或動物體內(或胚胎)的組織,將其剪碎至1mm3的組織塊,再采用的如下方法進行分離培養:一、懸浮細胞的分離方法1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉至離心管中,1000rpm/分鐘離心5分鐘。2、......