1 原理：
雙縮脲在堿性條件中，能與CuSO4結合成紅紫色的絡合物。pro分子中含有肽鏈與雙縮脲結構相似，也呈此反應。本法直接用于測定像小麥粉等固體試樣的pro含量。但作為銅的穩定劑，酒石酸鉀鈉比甘油好些。小麥粉中的pro能直接地一邊抽出一邊進行定量。
2 試劑
⑴甘油作為穩定劑：取10ml10N KOH溶液，3.0ml甘油加到937ml水中，激烈攪拌，同時加入4%CuSO450ml。
⑵酒石酸鈉作穩定劑，吸10ml10N KOH溶液和20ml25%酒石酸鉀鈉溶液加到930ml水中，激烈攪拌，同時加入4%CuSO4液40ml。
配制以上兩種溶液、試劑，必須澄清，無氫氧化銅生成，否則重配。
3 方法：樣品測定
標準曲線繪制
準確稱0.6g樣品→使用試劑（1）
準確稱0.5g樣品→使用試劑（2）
假如用試劑（2）
（1）準確稱樣→0.5g→于80ml離心管→加1mlClC4→混合→加50ml酒石酸鉀鈉穩定劑→蓋上蓋子離心10min（4000轉/分）→放置1小時→吸混合液15ml→于20ml離心管中→離心到完全透明→取上清夜5ml于→10ml容量瓶→加水定容→于550nm處測定吸光度，從標準曲線上查出pro含量。
（2）標準曲線繪制
按樣品測定方法，根據樣品中pro含量，取離心澄清樣液0.0 2.0 4.0 8.0 10.0ml于10ml容量瓶中→分別加水定容，按照樣品測定其吸光度。
事先用K氏定氮法測定樣品中pro含量為橫坐標，以上述吸光度為縱坐標繪制標準曲線。
4 計算：蛋白質%=C/W×100
C----從標準曲線上查得得pro含量（mg）
W----測定樣液時相當于樣品重量（mg）
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