基因工程的載體2

2、pUC質粒載體

1987年，J.Messing和J.Vieria采用MCS技術在pBR322基礎上構建的。

結構：

（1）來自于pBR322的Ori

（2）氨芐青霉素的抗性基因(ampr)。 但核苷酸序列發生了變化

（3） LacZ′基因

編碼β—半乳糖酶的α—肽鏈即氨基末端。

（4）MCS區段

是一段用于插入外源DNA片段的特定區域，由一系列的緊密相連的限制性內切酶位點組成，而且每個限制性內切酶位點在整個載體中是唯一的。

與pBR322相比， pUC質粒載體優點：

（1）具有更小的分子量和更高的拷貝數

如pUC8為2 750bp，pUCl8為2 686bp，控制質粒復制rop基因的缺失，平均每個細胞即可達500～700個拷貝

（2）適用于組織化學法檢測重組體

通過a-互補作用，利用菌落顏色篩選重組子。

（3）具有多克隆位點區段（MCS）

可以定向克隆防止載體自我連接。

二、噬菌體載體

（一）l噬菌體載體

1. 噬菌體的生物學特性

烈性噬菌體：只具有溶菌生長周期

溫和噬菌體：具有溶源生長周期和溶菌生長周期

溶菌周期指噬菌體將DNA注入寄主細胞后很快環化，然后進行自我復制、蛋白衣殼合成和新噬菌體顆粒的組裝，最后使寄主細胞破裂而釋放出大量的子代噬菌體。

溶源周期中，注入寄主細胞的噬菌體DNA是整合到寄主細胞染色體上并可以隨著寄主細胞的分裂而進行復制。

整合了一套完整的噬菌體基因組的細菌被稱為溶源性細菌。在溶源性細菌內存在的整合或非整合的噬菌體DNA被稱為原噬菌體。

2. l噬菌體的生物學特性

⑴組成：蛋白質外殼和線狀雙鏈DNA分子組成。

lDNA長度為48502bp，在分子兩端各有12個堿基的單鏈互補粘性末端。當其注入到寄主細胞中后，可以迅速通過這兩個粘性末端的互補作用形成雙鏈的環形DNA分子。上述通過粘性末端互補形成的雙鏈區被稱為cos位點（cohesive end site）.
⑵是一個溫和噬菌體

一般以溶源生長進行增殖，脅迫條件下也會進入溶菌生長周期。

⑶復制

溶源周期隨溶源細菌染色體一起復制

溶菌周期的早期是“θ”復制，晚期進行滾環復制