基因工程的載體3

⑷基因組成

lDNA至少包括61個基因，大多基因按功能相似性成簇排列，其中一部分為噬菌體生命活動的必須基因，另一部分約1／3為非必須區段。

3. l噬菌體載體的類型

插入型 （Insertion vectors ）

這種載體僅僅有一個可供外源DNA插入的克隆位點。

如：λgt10 、 λgt11

克隆能力小，不到10kb

置換型 （Replacement vectors）

這種載體具有兩個對應的酶切克隆位點，在兩個位點之間的λDNA區段是λ噬菌體的非必需序列，可以被外源插入的DNA取代。

如Charon 4 載體

克隆能力大，20～25kb

（二）M13噬菌體

1、絲狀噬菌體M13噬菌體的生物學特性

⑴是單鏈閉合環狀噬菌體

只能感染雄性細菌，外形成絲狀，基因組DNA長約6.4kb，可分為10個區和507 bp基因間隔區（IS區），該區可以接受外源DNA的插入而不會影響到噬菌體的活力。這是該噬菌體能用于單鏈DNA載體的重要前提。

⑵復制與增殖（圖）

2. M13噬菌體載體的構建

⑴ 在IS區內插入LacZ基因 ⑵在標記基因區內組裝MCS區段

所以能通過a互補在X-Gal/ IPTG平板上識別重組體。這類載體包括了 M13mp8、9 和 M13mp18 、 19等

這類載體的突出優點在于其既可以提供單鏈DNA，也可以提供雙鏈的DNA。其最大的不足在于插入大的DNA片段后表現不穩定，在噬菌體增殖過程中容易發生缺失。所以一般克隆的片段在1kb之內，克隆300-400bp的片段十分穩定。

（三）柯斯質粒載體

1.柯斯質粒載體的特點

柯斯質粒是一類人工構建的含有lDNA的cos序列和質粒復制子的特殊類型的質粒載體，cosmid是cos site carrying plasmid的縮寫。

柯斯質粒的大小為4-6kb，

由3部分組成：

A.多克隆位點區

B. 含有cos位點的lDNA區

C. 復制起始位點和抗性標記區

2.柯斯質粒載體的特性

1、具有l噬菌體的特性 柯斯質粒連接上適宜長度的外源DNA后可以在體外包裝成噬菌體顆粒，并能高效轉導寄主細胞。進入寄主細胞的DNA也能環化和復制，但是不會形成新的噬菌體顆粒，也不能發生溶菌現象。

2、具有質粒載體的特性 能象質粒一樣在寄主細胞內復制，且帶有抗性選擇標記基因，有些還帶有插入失活型的多克隆位點，為重組體的篩選提供了方便。

3、高容量的克隆能力 cos質粒本身很小，只有復制起點、選擇標記和cos位點等構成，所以其克隆上限可達45kb左右。不過由于包裝的限制，其克隆片段至少要達到30kb。

四種常用載體的比較