基因敲除技術概述（四）

[13]。
2.3.2 RNAi基因敲除的優點及應用
①.比用同源重組法更加簡便，周期大大縮短。
②.對于哺乳動物，如對于一些敲除后小鼠在胚胎時就會死亡的基因，可以在體外培養的細胞中利用RNAi技術研究它的功能。
③.由于RNAi能高效特異的阻斷基因的表達，它成為研究信號傳導通路的良好工具。
④.RNAi還被用來研究在發育過程中起作用的基因，如可用RNAi來阻斷某些基因的表達，來研究他們是否在胚胎干細胞的增殖和分化過程中其起著關鍵作用。
2.4實現基因敲除的其他原理。
除上述幾種已經比較成熟并且普遍使用了的基因敲除原理外，還有一些基于其他原理的敲除技術正處于研究和完善過程中，如TFOs（Triple helix forming oligonucleotides）引導的基因敲除術[16]以及反義技術在基因敲除技術中的運用等[17]。隨著遺傳學，分子生物學理論的發展，新的基因敲除原理也在不斷的發現和發掘中。
3．基因敲除技術的應用及前景：
①．建立生物模型。在基因功能，代謝途徑等研究中模型生物的建立非常重要。基因敲除技術就常常用于建立某種特定基因缺失的生物模型，從而進行相關的研究。這些模型可以是細胞，也可以是完整的動植物或微生物個體。最常見的是小鼠，家兔、豬、線蟲、酵母和擬南芥等的基因敲除模型也常見于報道。
②.疾病的分子機理研究和疾病的基因治療。通過基因敲除技術可以確定特定基因的性質以及研究它對機體的影響。這無論是對了解疾病的根源或者是尋找基因治療的靶目標都有重大的意義。
③.提供廉價的異種移植器官。眾所周知，器官來源稀少往往是人體器官移植的一大制約因素，而大量廉價的異種生物如豬等的器官卻不能用于人體。這是因為異源生物的基因會產生一些能引起人體強烈免疫排斥的異源分子，如果能將產生這些異源分子的基因敲除，那么動物的器官將能用于人體的疾病治療，這將為患者帶來具大的福音。如：PPL Therapeutics 公司于1999 年已成功地在豬的體細胞中用基因敲除技術敲除了α－1，3GT 基因。使每只豬都缺乏產生a１－３半乳糖基轉移酶的基因的２個拷貝。這些酶在細胞表面產生一種糖分子，人體的免疫系統可以立即辨認出這種糖分子為異源性，從而引發超急性免疫排斥反應。在缺乏這種酶的情況下，超急性排斥反應即不會再發生[10]。
④. 免疫學中的應用。同異源器官移植相似，異源的抗體用于人體時或多或少會有一定的免疫排斥，使得人用抗體類藥物的生產和應用受阻。而如果將動物免疫分子基因敲除，換以人的相應基因，那么將產生人的抗體，從而解決人源抗體的生產問題。
⑤改造生物、培育新的生物品種。細菌的基因工程技術是本世紀分子生物學史上的一個重大突破，而基因敲除技術則可能是遺傳工程中的另一重大飛躍。它為定向改造生物，培育新型生物提供了重要的技術支持。
4．基因敲除技術的缺陷
隨著基因敲除技術的發展，早期技術中的許多不足和缺陷都已經解決，但基因敲除技術始終存在著一個難以克服的缺點，即敲掉一個基因并不一定就能獲知該基因的功能，其原因包括：一方面，許多基因在功能上是冗余的， 敲掉一個
在功能上冗余的基因，并不能造成容易識別的表型，因為基因家族的其他成員可以提供同樣的功能；另一方面，對于某些必需基因，敲除后會造成細胞的致死性，也就無法對這些必需基因進行相應的研究了。
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