基因治療的方法（二）

  牛乳頭瘤病毒重組后，可不插入宿主染色體中引起插入突變，又可在宿主染色體外獨立復制，并表達出基因產物。有人發現，因缺少E1區而致復制缺陷的腺病毒，可在表達E1基因的細胞中繁殖。后來證明，載有外源DNA的復制缺陷腺病毒呈現相同繁殖的特點。1993年美法等國成功采用腺病毒載體進行心、腦、肺、肝內膽管和肌肉組織的體內基因轉移。它代表了基因治療的新方向。圖14－2是人的外源基因包裝在缺陷型反轉錄病毒中，感染細胞經培養后再輸入病人進行治療的模式圖。

  經培養后再輸入病人體內進行治療模式圖

　　最近，美國設計了一個新的腺病癥載體（圖14－3)，它是用一個化學連接器即賴氨酸鏈（lysine chain)將DNA栓在病毒外殼上，這樣組成的運輸器，通過一個表面抗體而進入細胞核，使宿主基因與治療基因共同表達。這個新病毒載體稱為腺病毒多賴氨酸DNA復合體（adeno virus-polylysine DNA-complex)。

　　采用復制缺陷的腺病毒進行基因治療有以下優點：①該病毒可感染分裂和非分裂的細胞，并能得到大量基因產物，對神經細胞、心肌細胞等基因缺陷的糾正有特殊意義；②病毒顆粒相對穩定，并易于純化和濃縮，且感染力不降低；③可有效轉導多種靶細胞后而少游離于細胞基因組外，并持續表達；④已用于基因治療的Ad5屬腺病毒C亞群，無致癌性。前述的新腺病毒載體還有一大優點是可以成功地運載48000bp的基因，而其它病毒只能運輸70 00bp的基因。這些優點顯示了腺病毒介導載體的廣闊應用前景。

　　2．靶細胞：

　　這里所指的靶細胞是指接受轉移基因的體細胞。選擇靶細胞的原則是：①必須較堅固，足以耐受處理，并易于由人體分離又便于輸回體內；②具有增殖優勢，生命周期長，能存活幾月至幾年，最后可延續至病人的整個生命期;③易于受外源遺傳物質的轉化；④在選用反轉錄病毒載體時，目的基因表達最好具有組織特異性的細胞。目前使用得較多的是骨髓干細胞、皮膚成纖維細胞、肝細胞、血管內皮細胞和肌細胞等。許多遺傳病與造血細胞有關，故可用于如β地貧、嚴重復合免疫缺陷病等的基因治療。皮膚成纖維細胞易于移植和從體內分離，又可在培養中生長，并易存活，故有人用之于乙型血友病的基因治療。有不少遺傳病表現了肝細胞功能缺陷，因此，在家族性高膽固醇血癥的治療中，有將低密度脂蛋白（LDL)受體基因轉移至肝細胞的嘗試。在動物實驗中已證明：β－半乳糖苷酶基因、ADA基因、小肌營養不良蛋白（minidystrophin)基因都已證明能在肌細胞中表達。