大腸桿菌超聲破碎

　　大腸桿菌的基因工程

　　一、原理：微生物 細胞在超聲波的作用下，細胞結構受到破壞，而使細胞破碎。

　　二、材料與試劑：超聲波破碎儀、顯微鏡、燒杯、細胞破碎緩沖液(10mmol/L，PH7.4Tris-HCL緩沖液中含5mmol/L的MgCL2)、細胞懸浮液(取50-100mg)大腸桿菌 濕細胞懸浮在1ml細胞破碎緩沖液中)、培養基(牛肉膏0.5%、蛋白胨1%，NaCL0.5%制成肉湯液體培養基。取上述肉湯培養基加進2%瓊脂 ，制成固體培養基，用作菌種活化與保藏)。

　　三、操作方法

　　1、細胞培養 和收集：將活化菌種接入肉湯培養基中，于37℃振蕩培養。當到達對數生長期后(約6h)，用離心機 收集細胞，8000r/min離心5min，或3000r/min離心20min。

　　2、在顯微鏡下觀察細菌 的形態特征。

　　3、細胞破碎：取濕細胞50-100mg懸浮于1ml細胞破碎緩沖液中。用20kHz頻率，150W的功率，在冰浴中進行超聲波破碎，每破碎60s，間隔60s，反復破碎三次。

　　4、在顯微鏡下觀察破碎后的細胞形態。