奧林巴斯熒光顯微鏡的工作原理

熒光顯微鏡的工作目標是對樣品得到一個放大像，使原來肉眼看不見的細節能變得清晰可見。這里有兩個基本的性能指標：一是分辨率極限，二是zui高有效放大倍數。分辨率是分辨物體細節的zui小極限。儀器可分辨的zui小細節經適當放大后，變成人眼所能看清者。顯然，如果超越了儀器分辨率的能力，即使進一步提高放大倍數，也不能讓人清晰看到更小的細節。這種現象必須借助于光的波動學說來解釋。

奧林巴斯熒光顯微鏡中所用的可見光源是波長為400一800nm的電磁波。波傳播的特性之一是衍射。衍射就是波遇到障礙物時能偏離直線傳播的性質。根據基礎物理知識可知，由于實際光學儀器都有限制光束的“窗口”（光學顯微鏡中的“窗口”就是物鏡邊緣所限制的透光范圍），它造成的衍射效應會使每個物點形成的像都是有所擴展的衍射光斑。靠得太近的像點彼此重登起來，會使畫面中的細節變得模糊不清。其它光學顯微鏡中還有一些像差（如球差和色差等）也會使像點展寬，但它們大多可以校矯正。所以衍射差就成了限制光學顯微鏡分辨率的*重要因素。

根據Huy8en分FmsMl原理可以得出：一個物點所形成的衍射像斑是一種強度大部分（約84％）集中在中心圓斑，而周圍伴有強度逐漸減弱的若干離散同心環的衍射花樣。中心圓斑（也稱Airy圓斑）的半徑r約為：

                                                      r≈0.16λ/sinθ

式中：λ—顯微鏡像方所用介質中的光波長

           θ—物鏡光闌（即物鏡“窗口”）對像點所張的半角．亦稱像方物鏡孔徑角或電子束半張角。光學儀器中通常采用Rayl出gh判據作為分辨率的標準，即當一個囚斑像約中心剛好落在另一相鄰圓斑像的邊緣上時，這兩個俄恰好能被分辨。因此圖像上可分辨的zui小距離眾就是Airy圓斑的半徑r。利用介質中的可見光波長入與真空中可見光波長的關系＝／n（n是物鏡像方所用介質的折射率），以及奧林巴斯熒光顯微鏡物鏡兩側有關參數的公式／M（是物鏡與物之間介質的折射率，是物鏡光闌對物點所張的半角，M是顯微鏡鎊所決定的圖像放大倍數）。

通常被稱為顯微鏡的數值孔徑（numericalaperture）。由式得知，因可見光的波長局限在400nm到800nm之間，故若要縮小可分辨距離久，就必須增大數值孔徑。但是為此只能靠提高的值，具體做法可以是在載物片與物鏡之間加油滴等。