如何避免支原體污染的應對策略

培養細胞時，

發現細胞增殖變慢、

形態漸漸改變，

是血清或培養基的問題嗎？

很有可能是你的細胞污染了~~~~~

支 原 體 污 染

細胞污染可分為細菌、霉菌、酵母菌、支原體污染，其中支原體污染發生的概率>50%。支原體(Mycoplasma) 是最小的原核生物，約0.1-0.3μm，可穿透0.22-0.45 μm 過濾膜 （BI血清經過3次0.1μm濾膜并且檢測支原體)。

支原體污染棘手的原因之一是沒有如其他污染源“立即可辨”的現象，支原體污染侵襲細胞但是并不一定致死。如果您的細胞出現如下狀態：增殖變慢、形態變差、培養液變黃但是沒有渾濁，說明您的細胞可能正遭受支原體的摧殘！！

受支原體污染的293T              正常無污染的293T

支 原 體 檢 測

怎么知道您的細胞正遭受支原體摧殘呢，常見的檢測方法幾種：

1. 分離培養法

將可疑樣本接種到支原體培養基中，觀察菌落生成。缺點:培養時間長，須3~5周才能判斷。

2.DNA熒光染色法

利用熒光染劑 (Bisbenzimide, Hoechst 33258) 檢測支原體污染，但若有些細胞易有熒光背景，可能會干擾結果判讀。

3.PCR法

利用特異性引物，經PCR反應檢測支原體DNA，靈敏且快速。

BI EZ-PCR支原體檢測試劑盒：采用PCR法，簡化了細胞培養中支原體污染的檢測過程，可檢測出細胞培養實驗中常見的支原體污染。

試劑盒中包含獨特的反應混合液，以及PCR中需要的所有試劑。使用者只需備有樣品，最后產物跑完膠后，如有一個270bp的片段，則代表有支原體污染，整個檢測過程耗時約4小時。

支 原 體 污 染 處 理

細胞培養常見的支原體污染為6種： 發酵支原體(M.fermentans)，唾液支原體(M.salivarum)，口腔支原體(M.orale)，精氨酸支原體(M.arginini)，豬鼻支原體(M.hyorhinis)，萊氏無膽甾原體(A.laidlawii)等，有些是動物來源，有些是人來源，支原體沒有細胞壁，所以使用青霉素等破壞細胞壁類藥物不具效用，建議使用專為支原體開發的處理試劑保護您珍貴的細胞。

支原體污染處理試劑：

BIOMYC-1 Antibiotic Solution 100X，貨號：03-036-1B/C/D。

BIOMYC-2 Antibiotic Solution 100X，貨號：03-037-1B/C/D。

BIOMYC-1 需BIOMYC-2按先后聯合使用。   

BIOMYC-3 Antibiotic Solution 100X，貨號：03-038-1B/C/D。

上述處理試劑可去除90%以上實驗室常見的支原體污染 (支原體非單一物種，無單一試劑能100%去除支原體污染)，不具細胞毒性，方法非常便捷。

支 原 體 污 染 預 防

俗話說，預防勝于治療，所以操作的器材與環境消毒也至關重要：

1. 超凈工作臺預防

BI也提供Pharmacidal (貨號: IC-110100)作為相應的處理試劑，Pharmacidal可有效預防真菌（和孢子），細菌（和孢子），支原體和病毒 (包括HIV和Hepatitis B) 的生長和污染。Pharmacidal成分為四苯甲基化合物，可生物降解，無毒，無刺激，對一般的工作臺和器材表面沒有任何損傷。不需稀釋，每次使用超凈工作臺前或每天噴灑一次臺面，二氧化碳培養箱每兩周一次噴灑消毒，噴灑后讓其自然風干，無需擦拭。

2.水盤為維持培養箱濕度所必需，但也成為潛在的污染源

BI的 Aquaguard-1 (貨號: 01-867-1B 100ml, 稀釋100倍使用) 消毒水盤效果非常好，而且不會腐蝕不銹鋼，無毒，不揮發。

3.其他實驗室的水浴環境也容易造成污染

BI的Aquaguard-2 (貨號: 01-916-1E 50ml, 稀釋500倍使用)，可以有效消毒任何形式的水浴環境。