實驗概要
本實驗主要介紹從小鼠大腦分離的神經膠質細胞的吞噬功能。
實驗步驟
為了檢測小膠質細胞的吞噬功能，利用凋亡的神經祖細胞作為目標，因為在體外環境下它能最模擬自然條件下小膠質細胞的吞噬目標。
1. 將神經祖細胞（NPC）置于0.1M PBS 2mg/ml木瓜蛋白酶（Worthington）溶液中進行分離，37oC作用30min。
2. 將分離的NPC 在紫外光下處理15-20min。
注：此步應該在一個很薄的塑料培養皿中進行，厚的塑料（如15或50毫升錐形管）將阻止很大部分紫外線光，導致細胞凋亡不理想。
3. 用含40mL PBS（RT）的50 mL錐形管中洗NPC，室溫離心（1200 轉/min，7min），緩慢減速，棄掉上清液。
4. 室溫條件下在5 mL 0 .1 M PBS溶液中重懸NPC。
5. 向NPC中加入5mL sta 5（6）-TAMRA，SE（Invitrogen公司），立即渦旋， 37oC避光孵育15min。
6. 用40 mL預冷的0.1M PBS洗3次（如步驟3）。
7. 將NPC懸浮在1 mL DMEM / F12（Invitrogen公司）培養液中雙抗（Invitrogen公司），用血球計數板計數細胞。稀釋或濃縮細胞數至5 ×10 6每毫升。
8. 按10:1的比例，將NPC加至小膠質細胞（已經吸附于24孔板中蓋玻片上），加入含10％胎牛血清（Atlanta生物）雙抗的900mL DMEM / F12培養基。
9. 置于37℃和5％CO2培養箱中培養。
10. 在所需的時間點（如1h，2h和5h）從培養箱中拿出。
11. 在無菌環境中，用鉗子拿出蓋玻片，在溫熱的PBS中輕柔的浸洗20次（除去未吞噬的NPC）。將蓋玻片置于含1mL4％PFA的24孔板中，再次放置蓋玻片于培養箱中等待下個所需的時間點。
12. 將細胞固定于蓋玻片上，避光20min，用0.1M PBS洗3次。
13. 用含10％血清、0.3％的Triton X-100和0.5％BSA的PBS溶液，避光作用1小時封閉蓋玻片。
14. 滴加CD11b的抗體（1:100）（eBioscience），避光，常溫孵育1h。
15. 用0.1M PBS洗蓋玻片3次PBS。
16. 滴加二抗（1:1000，Invitrogen公司），室溫下孵育1h。
17. 用0.1M PBS洗蓋玻片1次PBS。
18. 滴加DAPI（1:20,000）孵育5min。
19. 用0.1M PBS洗蓋玻片3次PBS。
20. 用Aqua-Mount封片劑封片。
21. 通常情況下， “吞噬指數”可以根據CD11b的小膠質細胞總面積除以NPC標記的總面積來計算。
22. 在共聚焦顯微鏡下用Z- stacks拍照檢驗NPC吞噬實驗的有效性。
腦血管網絡是大腦的生命線，其高度分支的結構支撐大腦繁重的生理代謝需求。在大腦發育早期，這套網絡需要經歷“塑形”——通過廣泛的血管修剪剔除冗余，將錯綜復雜的血管網絡重塑為高效精簡的成熟結構。在這一過程中......
近日，中國科學院深圳先進技術研究院（以下簡稱深圳先進院）研究員李漢杰團隊在《細胞》發表新研究，首次證實了人體外周神經系統內存在小膠質細胞。這一成果為探索外周神經系統發育及疾病，如慢性疼痛、嗜神經病毒感......
中國科學院深圳先進技術研究院研究員李漢杰團隊首次證實人體外周神經系統內存在小膠質細胞。這一發現打破了自1919年來“小膠質細胞僅存于中樞神經系統”的傳統認知，為探索外周神經系統發育及其疾病如慢性疼痛、......
記者7日從中國科學院深圳先進技術研究院了解到，該院研究員李漢杰團隊在人體外周神經系統內發現了小膠質細胞，刷新了過去科學界認為這種“免疫哨兵”只存在于大腦和脊髓的觀點，為進一步研究外周神經系統發育及相關......
在早期腦發育過程中，需要多個系統協同工作以確保大腦皮層的有序組裝。而各個系統如何實現精確的自我調節和相互通信是有待解決的重要科學問題。小膠質細胞作為中樞神經系統的固有免疫細胞，為維持自穩態及協調其他系......
免疫細胞作為防止病毒細菌等病原體入侵人體的“衛士”，是免疫系統中不可或缺的組成部分。明確免疫細胞類型、分化及功能狀態，對理解免疫力和揭示免疫相關疾病的發生發展機制具有重大的科學和社會意義。9月12日，......
神經系統（CNS）作為一個高度復雜、精密有序的結構，從早期胚胎發育的開始，就伴隨著非神經組織的駐留。其中，小膠質細胞（Microglia）作為神經系統的固有免疫細胞，來源于卵黃囊中的原始巨噬細胞，并在......
近日，山東大學基礎醫學院教授于書彥團隊在MolecularTherapy在線發表研究論文，揭示關于抑郁癥的最新研究成果。山東大學基礎醫學院博士研究生樊翠琴為第一作者，基礎醫學院生理與病理生理學系于書彥......
近日，基礎醫學院于書彥教授團隊在MolecularTherapy（中科院JCR期刊一區，五年IF=11.454）上在線發表了題為“MicrogliaSecreteMiR-146a-5p-Contain......
從小狗的叫聲到雨滴打在窗戶上的聲音，我們的大腦每秒鐘都會收到無數的信號。大多數時候，我們不理睬無關緊要的線索---蒼蠅的嗡嗡聲、樹上樹葉的輕柔沙沙聲---而注意重要的線索---汽車喇叭聲、敲門聲。這使......