左金丸生物堿含量測定

　　左金丸—總生物堿的測定—分光光度法

　　1 范圍

　　本方法采用分光光度法測定左金丸中總生物堿（以鹽酸小檗堿計算）的含量。

　　本方法適用于中成藥左金丸。

　　2 原理

　　供試品置索氏提取器用適量鹽酸-甲醇（1:100）回流提取后，定容。取一定量置中性氧化鋁柱凈化，收集乙醇洗脫液，定容。取一定量加 0.05mol/L 硫酸溶液稀釋定容。置紫外可見分光光度計, 于波長 345nm 處測定吸收度，以鹽酸小檗堿（C20H17NO4?HCl）的吸收系數（E^1%_1cm）728 計算總生物堿含量。

　　3 試劑（除特殊注明外均為分析純試劑）

　　3.1 鹽酸

　　3.2 甲醇

　　3.3 硫酸(0.05mol/L)

　　3.3 氧化鋁柱 (內徑 0.9cm，中性氧化鋁 5g，濕法裝柱，用 30mL 乙醇預洗)

　　4 儀器設備

　　4.1 紫外-可見分光光度計

　　4.2 索氏提取器

　　5 試樣制備

　　5.1 供試品溶液的制備

　　 取供試品粉末過三號篩（50 目），精密稱取 1g，置索式提取器中，加鹽酸-甲醇（1:100）適量，加熱回流至提取液無色，提取液移至 50mL 量瓶中，用鹽酸-甲醇（1:100）稀釋至刻度，搖勻。精密量取 5mL 照柱色譜法置氧化鋁柱上，用乙醇 25mL 洗脫，收集洗脫液，置 50mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。

　　注 1：“柱色譜法”系指色譜柱為內徑均勻，下端縮口的硬質玻璃管，下端用棉花或玻璃纖維塞住，管內裝入吸附劑。吸附劑的顆粒應盡可能保持大小均勻，以保證良好的分離效果。

濕法裝柱：將吸附劑與洗脫劑混合，攪拌除去空氣泡，徐徐傾入色譜柱中，然后加入洗脫劑將附著管壁的吸附劑洗下，使色譜柱面平整。

　　供試品的加入：將供試品溶液沿管壁緩緩加入，注意勿使吸附劑翻起。

　　6 操作步驟

　　6.1 供試品的測定

　　 精密量取供試品溶液 2mL，置 50mL 量瓶中，加 0.05mol/L 硫酸溶液稀釋至刻度，搖勻，照分光光度法，在 345nm 波長處測定吸收度。

注：分光光度法應以配制供試品的同批溶劑為對照，采用 1cm 的石英吸收池。以吸收度最大的波長作為測定波長，一般供試品的吸收度讀數，以在０.３－０.７之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度偏低。狹縫寬度的選擇，應以減少狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸收度后應減去空白讀數，再計算含量。

　　7 結果計算

　　定量測定按鹽酸小檗堿（C20H17NO4?HCl）的吸收系數（E^1%_1cm）為 728 計算：根據樣品溶液的稀釋倍數及測得的吸收度，求出 1%濃度的供試品溶液的吸收度，除以 728，乘以體積及稀釋倍數，除以供試品稱量，求出供試品中鹽酸小檗堿的含量。

　　C = 125000(AX/ER) /W

　　C — 為供試品的含量（mg/g）；

　　AX — 為供試品溶液的吸收度；

　　ER — 為（E^1%_1cm）345nm 的吸收系數為 728；

　　W －為供試品的稱量(g)。

　　注 1：E 為吸收系數，采用的表示方法是（E^1%_1cm），其物理意義為當溶液濃度為 1%（g/mL）,液層厚度為 1cm 的吸收度數值。

　　注 2：每 g 含總生物堿以鹽酸小檗堿（C20H17NO4?HCl）計，不得少于 60mg。

　　8 精密度：

　　 一般供試品溶液的吸收度讀數，以在 0.3-0.7 之間的誤差較小。取對照品溶液，連續測定 5次，其吸收度的相對標準偏差應不大于 2%。

　　9 參考文獻

　　 中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業出版社，2000 年版，一部，p.425。