常見免疫技術鑒析及化學發光納米磁微粒（一）

免疫學的發展史

免疫學的發展史起始于微生物學研究，于18世紀建立，19世紀至20世紀中期進入經典發展期。這一時期，人們對免疫功能的認識由人體現象的觀察進入了科學實驗時期。

20世紀初期到中期，進入近代免疫學時期。從20世紀中期開始，真正進入現代免疫學時期。現代免疫學的檢測基本歷經了以下幾個過程。

1960年前后

第一代免疫技術

放射免疫技術：利用放射性同位素作為標記物測量抗原抗體結合。

1970年前后

第二代免疫技術

酶聯免疫技術：利用活性酶作為標記物的酶聯免疫

1980年前后

第三代免疫技術

板式化學發光：非均相，微孔板，板界面反應，化學發光免疫技術

1990年至今

第四代免疫技術

納米磁微粒管式化學發光：均相，管式，在溶液中反應，化學發光免疫技術

免疫檢測原理

利用抗原和抗體的特異性反應進行檢測，利用同位素、酶、化學發光物質等對檢測信號進行放大和顯示，常被用于檢測蛋白質、激素等微量物質。免疫診斷在臨床診斷中占據著非常重要的地位，常見的免疫技術有放射性免疫、酶聯免疫、化學發光、電化學發光、納米磁微粒化學發光。

放射免疫技術原理

使放射性標記抗原和未標記抗原（待測物）與不足量的特異性抗體競爭性地結合，反應后分離并測量放射性而求得未標記抗原的量。用反應式表示為：

*Ag為同位素標記的抗原,與未標記的抗原Ag有相同的免疫活性，兩者以競爭性的方式與抗體Ab結合，形成*Ag-Ab或Ag-Ab復合物,在一定反應時間后達到動態平衡。

酶聯免疫技術原理

簡稱ELISA法，它的中心就是讓抗體與酶復合物結合，然后通過顯色來檢測。

使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。

在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。

用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺來進行定性或定量分析。

由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度，ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。

化學發光免疫分析（CLIA）是一種高度敏感的微量測定技術，凡具有抗原性的物質（包括半抗原）都可以用CLIA測定。CLIA起步于80年代初，快速發展于90年代。

化學發光技術原理

利用化學反應釋放的自由能激發中間體(常用堿性磷酸酶-金剛烷胺、辣根過氧化酶-魯米諾衍生物、辣根過氧化酶-魯米諾衍生物），使其從激發態回到基態。當中間體從激發態回到基態時會釋放等能級的光子，對光子進行測定而進行定量分析。

化學發光具有熒光的特異性，同時不需要激發光，避免了熒光分析中激發光雜散光的影響從而提高了靈敏度，并且避免了放射分析造成的環境污染和健康危害，是一種非常優秀的定量分析方法。

化學發光免疫分析（CLIA）是一種高度敏感的微量測定技術，凡具有抗原性的物質（包括半抗原）都可以用CLIA測定。CLIA起步于80年代初，快速發展于90年代。