| 實驗材料 | 0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | 平滑肌培養液 |
| 儀器、耗材 | Petri培養皿 手術刀和10號手術刀片 解剖剪 組織鑷 |
| 實驗步驟 | 1. 從小牛取胸主動脈。 2. 將胸主動脈浸入 Hanks 液。 3. 分離細胞之前將動脈放在冰上。 4. 將動脈放入 150 mm × 25 mm Petri 培養皿。 5. 用解剖剪沿長軸剪開動脈。 6. 用手術刀片輕刮動脈內腔面，以除去內皮細胞。 7. 將動脈的中膜與內膜和外膜分離。 8. 將中膜切成約 1 cm2 大小的組織塊。 9. 將中膜組織塊放入 60 mm × 15 mm Petri 培養皿，內膜側朝下。 10. 讓組織塊貼壁約 10 min。 11. 直接在組織塊上注 1 ml SMCM（平滑肌培養液（smooth muscle cell medium，SMCM）：DMEM 添加 20 % FBS，100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素）。 12. 將組織塊放入濕潤的培養箱，在 37°C 和 10% CO2 條件下孵育。 13. 第 2 天加入 5 ml SMCM，注意勿讓組織塊去附著。 14. 將組織塊繼續孵育 10 d。此后，平滑肌細胞從組織塊遷移出來，并變為單層。 15. 細胞生長接近形成單層時，用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液傳代。 |
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