慢病毒轉染細胞步驟

一、慢病毒  轉染貼壁細胞實驗方法

1、慢病毒轉染前18-24小時，將貼壁細胞  以1×10^5/孔鋪到24孔板中。使細胞在慢病毒轉染時的數量為2×10^5/孔左右。

2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鮮培養基  替換原培養基，加入適量病毒懸液。37℃孵育。

3、(對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟)4小時后加入2ml新鮮培養基以稀釋polybrene。

4、繼續培養24小時，用新鮮培養基替換含有病毒的培養基。

5、繼續培養。如果慢病毒含有熒光蛋白，一般轉染48小時后可見明顯熒光表達，72小時后更加明顯。如需FACS檢測轉染效率，可在轉染后72-96小時進行。如果慢病毒含有抗性基因并且需要加藥篩選，可以在轉染3-4天后開始加藥。

二、慢病毒轉染懸浮細胞實驗方法

1、在2×10^5/ml懸浮細胞中加入polybrene至6 μg/ml和適量病毒，充分混勻。37℃孵育。或者150g室溫離心4小時(選作，部分難轉染的細胞系采用此步驟可以提高轉染效率)。

2、(對polybrene毒性敏感的細胞選作此步驟)4小時后(或離心結束后)加入等體積新鮮培養基以稀釋polybrene。

3、繼續培養3-4天。中間視細胞生長情況可傳代或換液。