手性色譜柱——蛋白質型

　　 蛋白質型手性色譜柱屬于第5種類型。分離依賴于疏水相互作用和極性相互作用。已經有多種蛋白質用于此類手性色譜柱。目前使用較多的是α-酸性糖蛋白（α-Acid Glycoprotein，AGP），人血清白蛋白（Human Serum Albumin，HSA），牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）和卵類粘蛋白（Ovomucoid，OV）。

　　α-酸性糖蛋白分子由181個氨基酸殘基和40個唾液酸（sialic acid） 殘基構成。α-酸性糖蛋白分子偏酸性，等電點為2.7。含有兩個二硫鍵，性質很穩定。α-酸性糖蛋白分子可以共價鍵合到硅膠上，制成手性色譜柱，可以分離許多化合物。

　　 α-酸性糖蛋白手性色譜柱使用的流動相通常為pH 4-7的磷酸鹽緩沖液和很小比例的有機相。有機相首選異丙醇，如達不到分離要求，可以嘗試乙腈，乙醇，甲醇或四氫呋喃。有機相的改變導致蛋白結構發生暫時的改變。色譜柱的負載量至關重要，典型的負載量為0.02mg/ml的濃度樣品，進樣20μl。pH 的改變對手性選擇性起關鍵作用，尤其是胺類化合物。pH降低導致蛋白質負電荷的降低，引起胺類化合物保留時間減小，然而這意味著可以減小有機相比例，使選擇性增加，峰形改善。

　　 通過調節有機相比例仍無法達到分離效果時，有時需用電荷調節劑。但這可能引起蛋白結構的永久改變，這些電荷調節劑包括丁酸、辛酸、癸酸和二甲基辛胺。有時也用到1，2 亞乙基二醇，1，2丁醇和氯化鈉。溫度對分離也有影響，溫度增加保留時間，減小分離因子。

　　人血清白蛋白（HSA）分子量為69,000，等電點為4.8。蛋白中認為存在兩個藥物結合位點：華法令-氮雜普魯帕宗（warfarin-azapropazone） 和苯基二氮雜-吲哚（benzodiazapine-indole）結合位點。流動相中加入辛酸，采用人血清白蛋白手性色譜柱可以有效分離benzodiazapine。Warfarin 和oxazepam也用人血清白蛋白手性色譜柱得到了分離，流動相組成為：100mM磷酸緩沖液pH7：乙腈：異丙醇 = 84：10：6。

　　 牛血清白蛋白（BSA）為球型蛋白，分子量為66,000，等電點為4.7。此蛋白為一個單氨基酸鏈，通過17個二硫鍵形成9個雙環。許多化合物通過牛血清白蛋白手性色譜柱得到分離。牛血清白蛋白不如α-酸性糖蛋白穩定，一些有機溶劑（如乙腈、甲醇）可使蛋白變性，因此使用起來要特別注意。

　　 卵類粘蛋白由蛋清中提取，分子量為55,000。它可分離大量的胺類和酸類化合物。

　　 蛋白手性色譜柱的載樣量均較小。影響了蛋白手性色譜柱在制備色譜中的應用。

　　 蛋白手性色譜柱在所有手性色譜柱中是應用最廣的色譜柱，但并不是效果最好的色譜柱。